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背景:阿司匹林是最常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs）之一,由于其特殊的抗血小板作用而被广泛应用于预防和治疗心脑血管性疾病。然而阿司匹林的消化道副作用又限制了其应用。它可以引起消化不良、胃肠道出血、穿孔等多种副反应。关于阿司匹林引起的胃黏膜损伤的机制目前尚未完全明确。已有的研究表明阿司匹林可以通过调节微小RNA（miRNAs）发挥抗炎、抗血小板、抗癌等功能。有研究发现miR-877-5p在服用NSAIDs类药物的患者血清中表达升高,但尚无关于miR-877-5p与阿司匹林相关胃黏膜损伤之间关系的研究。3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（3-phosphoinositide-dependent kinase1,PDK1或PDPK1）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,参与多种细胞系的增殖、分化、凋亡和侵袭等生物学过程。本实验通过研究miR-877-5p在阿司匹林损伤的胃黏膜上皮细胞GES-1中的作用及其与PDK1之间的关系,为阿司匹林相关胃黏膜损伤的发病机制提供新的思路。目的:本研究旨在探究miR-877-5p在阿司匹林损伤胃黏膜上皮细胞中的作用及其可能的作用机制。方法:1.建立不同浓度阿司匹林（1.25、2.5、5和10mmol/L）处理GES-1细胞的模型,实时荧光定量PCR检测其中miR-877-5p和表达情况。2.向GES-1细胞中转染miR-877-5p mimic和inhibitor及其相应的阴性对照剂,并加IC10浓度的阿司匹林进行处理,CCK-8实验用于检测细胞的增殖情况,流式细胞技术用于检测细胞的凋亡情况。3.利用生物信息学软件对miR-877-5p进行靶基因预测,并对这些筛选的靶基因进行初步的GO和pathway研究,筛选miR-877-5p可能的靶基因。荧光定量PCR检测不同浓度阿司匹林（1.25、2.5、5和10mmol/L）处理GES-1细胞的靶基因m RNA表达水平,分析其与miR-877-5p之间的相关性。4.预测miR-877-5p与靶基因3’UTR端结合位点,并构建野生型靶基因3’UTR荧光素酶报告质粒和突变型靶基因3’UTR荧光素酶报告质粒,采用双荧光素酶报告实验验证miR-877-5p和靶基因之间的靶向调控关系。5.向GES-1细胞中转染miR-877-5p mimic和inhibitor及其相应的阴性对照剂,并加IC10浓度的阿司匹林进行处理,实时定量PCR检测靶基因m RNA的改变情况,Western blot实验检测靶基因蛋白水平的变化情况。结果:1.荧光定量PCR结果显示:miR-877-5p在各浓度组阿司匹林损伤的GES-1中均高表达,且随着阿司匹林浓度的增加而增加（p＜0.05）。2.CCK8结果显示:转染了miR-877-5p mimic组的细胞增殖能力明显低于对照组（p＜0.05）,转染miR-877-5p inhibitor组的细胞增殖能力高于对照组（p＜0.05）;流式细胞技术结果显示:转染了miR-877-5p mimic组的细胞凋亡率明显高于对照组（p＜0.05）,转染miR-877-5p inhibitor组的细胞凋亡率低于对照组（p＜0.05）。3.利用miRanda、Targetscan和miRWalk三个数据库预测出的共同靶基因有945个,生物信息学分析发现这些靶基因参与细胞的多种生物学过程,我们筛选出PDK1作为miR-877-5p的靶基因。荧光定量PCR结果显示PDK1m RNA在各浓度的阿司匹林组中均低表达,且随着阿司匹林浓度的增加而降低,当阿司匹林浓度大于1.25mmol/L时PDK1 m RNA表达差异具有统计学意义（p＜0.05）。4.共转染miR-877-5p mimic和野生型PDK1 3’UTR质粒组的荧光素酶活性明显低于阴性对照组,而突变型PDK1 3’UTR质粒组的荧光素酶活性无明显变化,这提示miR-877-5p与PDK1靶向结合。5.相较于对照组,转染miR-877-5p mimic组的细胞中PDK1m RNA表达和蛋白水平表达均明显降低,而转染miR-877-5p inhibitor组的细胞中PDK1 m RNA水平和蛋白表达水平上调。结论:1.miR-877-5p在阿司匹林损伤的GES-1表达上调,且随着药物浓度的增加而增加;2.miR-877-5p具有促进阿司匹林对GES-1细胞的凋亡作用和抑制细胞增殖的作用。3.miR-877-5p可通过靶向作用于PDK1基因,调控其转录和翻译,参与阿司匹林对GES-1的损伤过程。