牛白血病病毒（Bovine leukemia virus,BLV）是属于逆转录病毒科丁型反转录病毒属的一名成员。BLV可在奶牛体内建立持续感染,多数感染牛临床症状不明显或呈长期潜伏感染状态。BLV在世界范围广泛流行,可经血液和淋巴系统下行感染奶牛乳腺组织。目前已知BLV能够在奶牛乳腺上皮细胞中稳定复制,BLV阳性奶牛终生泌乳量、乳铁蛋白含量、乳脂肪和乳蛋白总产量降低,但关于BLV感染乳腺后对乳蛋白、乳脂肪合成过程的影响机制尚未明确。本试验首先拯救单一源性的BLV,构建BLV感染奶牛乳腺上皮细胞系（Bovine mammary alveolar cell line,MAC-T）模型,研究BLV感染对MAC-T中乳成分合成过程的影响,为全面认识BLV下行感染乳腺对牛奶品质的影响提供研究基础。选择大庆市某规模化牧场106头泌乳奶牛作为研究对象,分析BLV阳性牛和阴性牛对产奶量、乳脂肪和乳蛋白含量的影响。利用获得的包含BLV全长基因的感染性克隆感染293-T细胞从中拯救BLV病毒;应用Reed-Muench法计算拯救病毒在293-T细胞和MAC-T细胞中的感染力;建立BLV+293-T+F81共培养体系对拯救毒株进行验证。建立BLV+MAC-T共培养体系,采用逆转录实时荧光定量PCR检测法,绘制该病毒在MAC-T中生长曲线。BLV按3 MOI感染剂量感染MAC-T,利用荧光定量PCR法检测不同时间（6h、12h、24h、36h、48h、60h）MAC-T中脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FASN）、乙酰辅酶A羧化酶1（Acetyl-Co A carboxylase1,ACC1）、固醇调节元件结合蛋白（Sterol regulatory element binding protein,SREBP）、过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs）以及四种酪蛋白β-酪蛋白（Beta-casein,CSN2）、αS1酪蛋白（Casein alpha S1,CSN1S1）、κ-酪蛋白（Kappa-casein,CSN3）和αS2酪蛋白酪蛋白（Casein alpha S2,CSN1S2）的mRNA的相对表达量;用Western-blot法检测SREBP1、PPARγ、ACC1、FASN和CSN2的蛋白表达水平。采用激光共聚焦对脂滴形成情况进行核定位检测。BLV按1 MOI感染剂量感染MAC-T后细胞传代培养,对传代培养的第1代、第4代、第6代和第11代的细胞进行检测,明确长期慢性感染BLV对乳腺上皮细胞乳成分合成功能的影响。结果表明:BLV感染对泌乳奶牛的产奶量影响差异不显著,乳脂肪含量显著降低,乳蛋白含量降低,但是差异不显著。293-T细胞中成功拯救了BLV毒株,其在MAC-T中的感染力为58.75 TCID50/mL,BLV感染MAC-T 48h后对数增长期结束。BLV持续感染能够极显著降低MAC-T中乳脂合成的关键转录因子SREBP1（P<0.001）及脂肪酸代谢相关酶ACC1（P<0.001）和FASN（P<0.001）的转录、翻译和核位移水平,极显著上调乳脂合成的关键转录因子PPARγ的翻译水平（P<0.001）;BLV持续感染后,MAC-T中的CSN2、CSN3、CSN1S1、CSN1S2的mRNA表达水平呈极显著升高（P<0.001）,但其中酪蛋白的表达水平极显著下降（P<0.001）。BLV+MAC-T传代后,SREBP1的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）,PPARγ的mRNA表达水平无生物学差异;与mRNA表达结果一致,SREBP1的蛋白表达水平呈极显著降低趋势（P<0.001）,PPARγ的蛋白表达水平同样无生物学差异;脂肪酸从头合成酶相关基因FASN和ACC1的mRNA表达水平整体呈极显著下降趋势（P<0.001）,但随着细胞传代数的增加FASN和ACC1的mRNA表达水平逐步恢复,与mRNA表达水平不同,FASN的蛋白表达水平逐步降低至极显著差异（P<0.001）,ACC1的蛋白表达水平整体呈极显著增加趋势（P<0.001）;BLV+MAC-T传代后,细胞中乳蛋白相关基因CSN2、CSN3、CSN1S1及CSN1S2的mRNA相对表达水平呈极显著升高趋势（P<0.001）,且随着传代数的增加,mRNA的表达水平逐步增加,但CSN2的蛋白表达水平却随着传代数的增加从极显著下降（P<0.001）逐步升高为极显著增加趋势。综上所述,BLV感染抑制MAC-T中CSN2的表达,同时抑制MAC-T脂代谢相关分子的转录和翻译水平,对脂肪酸（Fatty acids,FAs）从头合成产生影响,从而调控乳脂肪的合成。