姜黄素诱导三种肿瘤细胞系自噬及凋亡的研究

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目的:研究姜黄素对人结肠癌细胞SW480、人肝癌细胞HepG2和人胃癌细胞SGC7901自噬及凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:用不同浓度的姜黄素(终末浓度为10.0、20.0、40.0、80.0μM)处理SW480、HepG2和SGC7901细胞, MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色,观察细胞自噬和凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测NF-κB、LC3及Beclin1蛋白的表达。结果:姜黄素抑制SW480、HepG2、SGC7901细胞增殖效应均表现出剂量依赖性,随着姜黄素浓度的增加,三者的存活率均逐渐降低,姜黄素对SW480、HepG2、SGC7901细胞作用24h时的IC50浓度分别为45.48μM、37.54μM、39.78μM,约在40μM左右。MDC染色及Hoechst33342核染色结果显示40μmol/L姜黄素处理上述三种细胞12h后即在胞质中可见大量自噬小泡的形成,在显微镜下呈亮绿色荧光,而此时凋亡则不明显,在显微镜下可看到少数细胞胞核呈现亮蓝色荧光;在24h时三种细胞胞质内仍可见到自噬小泡,但此时凋亡细胞明显增多,在显微镜下可见到大量呈现亮蓝色荧光的细胞核。因此,40μmol/L姜黄素可诱导三种细胞发生自噬和凋亡,且自噬早于凋亡。流式细胞仪检测姜黄素处理24h时SW480、HepG2、 SGC7901细胞凋亡比率均明显升高,依次为:0.43±0.22%增至37.75±1.55%、0.33±0.32%增至40.2±2.23%、0.29±0.45%增至36.82±0.55%。WesternBlot结果发现姜黄素处理上述三种细胞后,NF-κB、LC3及Beclin1蛋白的表达明显增加;进一步说明姜黄素诱导上述三种癌细胞发生自噬和凋亡与NF-κB、LC3及Beclin1蛋白相关。结论:1.姜黄素抑制SW480、HepG2、SGC7901细胞增殖效应呈剂量依赖性;2.其抑制SW480、HepG2、SGC7901细胞增殖的效应可能与诱导自噬、促凋亡有关;3. NF-κB、LC3及Beclin1蛋白可能参与姜黄素诱导的自噬及凋亡的过程。
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