温州海洋红树植物秋茄叶黄酮的提取及抗氧化活性研究

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秋茄(Kandelia candel)是红树林中一种较为常见的植物,通常生长在港湾河口地区的淤泥质滩涂上,周期性遭受海水浸淹的潮间带环境,使其在结构与功能上具有既不同于陆地生态系统也不同于海洋生态系统的特性。浙江省是红树植物秋茄地理分布的最北端(28025’N),目前鲜有学者专门研究浙江省秋茄植物体内的有效成分及其活性。本课题以浙江省温州市乐清西门岛南岙山村滨海湿地采集的秋茄作为研究对象,重点考察两方面的内容:一、基于黄酮含量的提取工艺研究(1)实验用NaNO2-Al(NO3)3方法考察秋茄叶总黄酮含量,经方法学验证,槲皮素在1.35-8.10μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为y=0.053x-0.003(R2=0.9990),回收率98.75%-102.50%,RSD=0.30%(n=5).该方法准确可靠,可用于测定秋茄叶总黄酮含量。(2)用NaN02一Al(N03)3方法测定秋茄叶总黄酮含量,经单因素实验考察温度、乙醇浓度、料液比和提取时间四个因素对总黄酮提取率的影响;经L9(34)正交实验设计,考察这四个因素对黄酮提取率的影响,结果显示:料液比>乙醇浓度>时间>温度。最佳工艺为:80%乙醇、料液比1:30、80℃、提取1小时。二、基于抗氧化活性的提取工艺研究从清除DPPH自由基、清除·OH自由基、Fe3+的还原三个方面考察秋茄叶抗氧化的有效成分,比较秋茄叶抗氧化成分的最优工艺与黄酮最优提取工艺,判断抗氧化活性与黄酮是否存在相关性。(1)DPPH自由基清除:90℃、料液比1:35,80%乙醇加热提取1小时的样品提取液,样品添加量最少仅0.79mL,黄酮含量为17.8μg/mL,微弱于对照品Vc的清除能力(ECs0值8.23μg/mL),但是实验中紫红色褪色明显,说明秋茄叶醇提物也具有很强的清除DPPH自由基的能力。(2)2-脱氧-D-核糖法清除·OH自由基:80℃、料液比1:25,80%乙醇加热提取1小时的样品提取液,样品添加量最少仅0.213mL,黄酮含量为8.84μg,强于黄酮最优工艺提取液,强于对照品BHA的清除能力。(3)Fe3+还原:90℃、料液比1:25,80%乙醇加热提取1小时的样品提取液,该工艺下的样品溶液还原能力最强,优于黄酮最优工艺提取液,实验过程中颜色变化不及对照品BHA迅速,折算黄酮含量低于对照品,间接反映秋茄叶乙醇提取物的还原能力弱。综上可知,秋茄叶抗氧化活性提取工艺与黄酮提取工艺存在差异,在其抗氧化活性评价中不能仅仅设定黄酮一个评价指标,从多方面进行考察。
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