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目的：
1.检测温州医学院附属第二/育英儿童医院2005年临床分离的45株产ESBLs大肠埃希菌中整合子的整合酶及插入的相关基因盒情况，分析整合子对细菌耐药性的影响。
2.了解温州医学院附属第二医院产ESBLs大肠埃希菌耐药情况及该70株细菌的常见β-内酰胺酶的基因型别。
3.观察不同亚抑菌浓度的头孢西丁，头孢噻肟及头孢他啶对其中共15株产ESBLs大肠埃希菌进行不同时间的作用后，体外耐药质粒接合转移率的变化情况。
方法：
1.采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法对45株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌进行药敏试验：应用聚合酶链反应(PCR)法检测45株产ESBLs大肠埃希菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子；对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。
2.采用K-B琼脂扩散法检测70株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对14种抗生素的耐药性，PCR法检测其常见β-内酰胺酶的基因型别，选部分PCR产物进行测序。
3.采用微量肉汤稀释法检测其中共15株产ESBLs大肠埃希菌的头孢西丁，头孢噻肟及头孢他啶MIC值，并以肉汤接合方法观察该三种药物不同的亚抑菌浓度及不同时间作用后耐药质粒的接合转移率变化情况。采用两因素多水平的析因分析统计学方法分析结果。
4.采用微量肉汤稀释法检测经头孢西丁作用后各接合子对该药物的MIC值。
结果：
1.45株菌中有27株(60.0％)含有Ⅰ类整合子，没有检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中，有23株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(85.2％)，5种不同的基因盒图谱，片段大小在600bp～2322bp之间，分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒；Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。
2.70株产ESBLs的大肠埃希菌对14种抗生素的敏感性排在前三位的是：亚胺培南(100％)，头孢哌酮/舒巴坦(100％)，哌拉西林/他唑巴坦(94.1％)；PCR电泳结果提示：62(88.6％)株出现。TEM阳性条带，5(7.1％)株出现SHV阳性条带，1(1.4％)株出现OXA阳性条带，61(87.1％)株出现CTX-M阳性条带，未见VEB及PER阳性条带，53(75.7％)株同时检测到TEM和CTX-M阳性条带，2株未检测到任何DNA扩增片断，阴性率为2.9％。
3.5株TEMPCR产物测序均为TEM-1型，3株SHVPCR和1株OXAPCR产物测序结果不对。
4.不同亚抑菌浓度的头孢西丁对5株产ESBLs大肠埃希菌进行不同时间作用后的接合转移率结果为：在相同的时间作用下，不同亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移率没有影响(P＞0.05)；在相同亚抑菌浓度头孢西丁条件下，不同时间的作用对接合率也没有影响(P＞0.05)；并且不同时间与不同亚抑菌浓度之间对接合率也无交互作用(P＞0.05)。
5.头孢西丁作用后各接合子对头孢西丁的MIC值均高于供体菌。
6.不同亚抑菌浓度的头孢噻肟对5株产ESBLs大肠埃希菌进行不同时间作用后的接合转移率结果为：在相同的时间作用下，不同亚抑菌浓度头孢噻肟对耐药质粒接合转移率没有影响(P＞0.05)；在相同亚抑菌浓度头孢噻肟条件下，不同时间的作用对接合率有影响(P＜0.05)，6小时的接合转移率最高，4小时和8小时的接合转移率差不多，2小时和10小时的接合转移率相近，前者高于后者；并且不同时间与不同亚抑菌浓度之间对接合转移率无交互作用(P＞0.05)。
7.不同亚抑菌浓度的头孢他啶对5株产ESBLs大肠埃希菌进行不同时间作用后的接合转移率结果为：在相同的时间作用下，不同亚抑菌浓度头孢他啶对耐药质粒接合转移率没有影响(P＞0.05)；在相同亚抑菌浓度头孢他啶条件下，不同时间的作用对接合率有影响(P＜0.05)，6小时的接合转移率最高，2小时和4小时的接合转移率一样均低于8小时的接合转移率，10小时的接合转移率最低；并且不同时间与不同亚抑菌浓度之间对接合转移率无交互作用(P＞0.05)。
结论：
1.Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs大肠埃希菌株中分布广泛，整合子在细菌耐药中发挥作用。
2.产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素均有较高的耐药率，治疗产ESBLs大肠埃希菌引起的感染首选药物为亚胺培南，其次为β-内酰胺酶抑制剂复合物及阿米卡星、头霉素类。
3.产ESBLs大肠埃希菌耐药基因以TEM型，CTX-M型为主，临床应重视产ESBLs细菌的检测，根据药敏试验结果合理用药。
4.不同亚抑菌浓度药物作用后，耐药质粒接合转移率有随药物浓度降低而升高的趋势；细菌经头孢西丁作用后，出现了细菌对其MIC值升高的现象；三代头孢菌素药物头孢噻肟和头孢他啶不同时间作用后引起了耐药质粒接合转移率的改变；说明了药物浓度和作用时间不当都可能是引起细菌耐药性增加和耐药性播散的危险因素。