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梨轮纹病是由葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea(B.dothidea)引起,主要危害蔷薇科树体枝干和果实,尤其在苹果和梨树果园中普遍发生的一类枝干病害,能引起树势衰弱,造成烂果,致使果品质量和产量受损,对果农造成严重的经济损失。真菌病毒介导弱毒菌株可作为生物防治真菌病害的一条主要途径,课题组初步证实侵染梨轮纹病病菌的真菌病毒BdCV1(Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1)引起轮纹菌致病力衰退,具有生防应用前景。本研究开展BdCV1抗体制备和检测效果分析,测定BdCV1在轮纹菌中的传染效率,分析其作为生防因子实践应用的可行性;证实BdCV1侵染下梨轮纹菌中mil RNA的存在和表达,分析预测mil RNA介导靶基因的表达模式,从分子水平上探究病毒对基因的影响。取得的具体研究结果如下:1.BdCV1抗体制备及检测效果分析采用蔗糖梯度超速离心提纯LW-C菌株中BdCV1病毒粒体,免疫大耳白兔,获得BdCV1多克隆抗体,测定抗体效价为1:51200;运用Western blot证实了BdCV1抗体具有较好的特异性。筛选和优化各项参数,建立了BdCV1抗血清与无毒菌株LW-Mock以1:100(v/v)倍比于4℃过夜吸附并稀释12800倍作为抗体工作浓度,待测样品菌丝1:10(g/m L)倍比稀释作为抗原模板的间接ELISA检测体系,能有效筛选田间轮纹病病菌携带产黄青霉病毒BdCV1不同分离物,研究结果为探究BdCV1与寄主互作关系并筛选BdCV1介导弱毒株系用于生物防治奠定基础。2.BdCV1在轮纹病病菌菌株中传染能力测定及分析通过水平传染方式,将LW-C与遗传背景相同携带病毒的菌株以及其他地理来源不同的梨轮纹病病菌分离株进行对峙培养,结果表明,BdCV1均能成功传染至来源不同菌株,明确了LW-C弱毒因子BdCV1较强的传染能力及对受体菌株生物学特性的影响;BdCV1与含有病毒轮纹菌株间的传染结果可能触发了寄主基因沉默反应。以上结果反应了病毒与寄主互作的表现形式以及LW-C携带BdCV1的生防潜能。3.BdCV1对梨轮纹病病菌基因表达的影响BdCV1在轮纹病病菌中的传染实质上是病毒与寄主互作的反应结果,为了进一步在分子水平上探究寄主中参与与BdCV1互作的基因,结合实验室前期获得的梨轮纹病病菌的转录组、小RNA和全基因组测序结果,重新对mil RNA及其预测的靶基因进行生物信息学分析。采用Stem-loop RT-PCR和poly(A)RT-PCR验证了BdCV1侵染下4个已知的Bd-mil RNAs和2个新的Bd-mil RNAs,明确了病毒侵染下Bdmil RNA在梨轮纹病病菌中存在和表达;从中选取了20个Bd-mil RNAs介导假定靶基因进行表达模式分析,结果表明,对比其他病毒(单独或复合感染Bd PV1)及无病毒条件下,BdCV1对梨轮纹病病菌基因表达影响程度不同,表明寄主基因表达量差异是病毒间以及病毒与寄主互作的反应,取得的初步结果对深入了解mil RNA调控m RNA在梨轮纹病病菌与真菌病毒相互作用中提供分子信息,也为寻找真菌病毒介导弱毒菌株生物防治果树轮纹病害提供有益候选基因材料。综合以上结果,本研究以BdCV1为对象,分离纯化病毒制备其抗体,测定并分析其在轮纹菌株中传染力及对寄主生物学和基因表达的影响,取得的研究结果为高效检测田间轮纹病病菌携带BdCV1分离物、全面评价BdCV1介导LW-C用于生防实践可行性及病毒侵染下与寄主互作研究奠定了基础,为进一步探究梨轮纹病害生物防治挖掘了潜在候选基因资源并提供了新思路。