【摘 要】
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菝葜(Smilax china L.)根茎是一种常见的中药材,具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗氧化、免疫抑制等多种生物活性。菝葜中含有多种生物活性成分,如黄酮、皂苷、氨基酸、多糖和有机酸等。其中多糖作为菝葜根茎中一种重要的活性物质,研究却较少。溃疡性结肠炎(UC)是有关结直肠的一种肠道慢性炎症性疾病,在现代社会中发病率逐年升高,已经成为了一种重要的健康问题。传统药物对UC有一定的治疗作用,但是有副作用,
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菝葜(Smilax china L.)根茎是一种常见的中药材,具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗氧化、免疫抑制等多种生物活性。菝葜中含有多种生物活性成分,如黄酮、皂苷、氨基酸、多糖和有机酸等。其中多糖作为菝葜根茎中一种重要的活性物质,研究却较少。溃疡性结肠炎(UC)是有关结直肠的一种肠道慢性炎症性疾病,在现代社会中发病率逐年升高,已经成为了一种重要的健康问题。传统药物对UC有一定的治疗作用,但是有副作用,且难以根除。寻找和利用天然产物以预防UC具有重要意义。研究发现植物多糖对UC有较好的预防作用,且菝葜多糖具有抗炎作用。本论文分别对菝葜多糖进行了提取工艺的优化,然后对菝葜多糖进行纯化。利用纯化前后菝葜多糖对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠及其肠道菌群多样性的影响进行探究,主要研究如下:1.对菝葜多糖的提取时间,提取温度,料液比三个条件进行响应面优化。得到提取最佳参数为:提取温度:81.6℃;提取时间:117 min;料液比:1:20.5,提取率为7.1%。用此工艺提取后,再经过除蛋白和淀粉、醇沉、透析等过程得到粗多糖(SCP_C),总糖含量为68.4%。SCP_C经DEAE纤维素柱层析得到水洗层(SCP_N)与0.05 mol/L Na Cl洗层(SCP_A)两个组分,它们总糖含量分别为88.5%与86.7%。2.将雄性健康Balb/c小鼠60只分成6组(n=10):空白对照组、模型组、阳性药物组、SCP_C组、SCP_A组、SCP_N组。正常组和模型组的小鼠灌胃10 m L/kg BW/D的蒸馏水,三组菝葜多糖剂量均为200 mg/kg BW/D,阳性对照采用柳氮磺吡啶肠溶片50 mg/kg BW/D。灌胃2天后小鼠开始饮用DSS,直至试验结束。在试验结束后,所有小鼠经眼眶取血后脱颈处死,解剖获取结肠、脾脏等器官;分析血清和结肠组织中相关生化指标。与模型组相比三种菝葜多糖均能降低DAI评分,缓解UC小鼠的病理症状与结肠的缩短,从结肠组织切片来看SCP_N组效果最好;三种菝葜多糖提高小鼠血清中GSH的活性,降低结肠组织中MDA的含量;菝葜多糖降低小鼠结肠组织中的TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO水平;上调IL-10水平。3.通过对小鼠盲肠内容物的测序,得知模型组小鼠的肠道微生物的种类与丰度皆大幅度下降;Firmicutes(厚壁菌门)与Bacteroidetes(拟杆菌门)含量急剧下降,肠道菌群的平衡系统被严重打破,肠道益生菌减少。在菝葜多糖干预下,这些情况得到不同程度的恢复,其中SCP_N效果最佳,具有丰富肠道微生物的能力;改善肠道菌群失调的能力;改善肠道菌群结构的能力。菝葜多糖通过抑制小鼠氧化应激反应,降低促炎因子水平,上调抗炎因子表达,增加肠道菌群多样性,调节肠道菌群失衡以及改善肠道菌群结构来缓解UC小鼠症状。综合来看,SCP_N效果最佳。
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