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目的:阿尔茨海默病(AD)是一种与衰老相关的神经退行性疾病,其主要的临床特征为认知功能的逐渐丧失,行为改变和日常生活活动能力降低。虽然AD是最常见的痴呆形式,但因其病因尚不清楚,严重限制了 AD的药理学治疗。人类寿命的延长,加上老年人AD的高发,加剧了全球公共卫生成本。本研究从行为学和分子生物学方面观察智三针对大鼠认知功能、学习记忆能力、细胞形态及其相关蛋白的影响,探讨智三针改善AD大鼠认知功能及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的可能机制,结合海马区与学习记忆能力的功能联系,进一步阐明智三针治疗AD的潜在机制,为智三针治疗AD的临床应用提供实验依据。方法:将60只大鼠按随机数表法分为正常组、模型组、智三针组、非穴组,每组15只,用双侧脑室注射A β 1-40联合腹腔注射D-半乳糖诱导AD大鼠模型。智三针组大鼠选穴为“神庭”及双侧“本神”,电针选用连续波型,频率为30Hz,电流为1mA,每次治疗留针时间为30min。非穴组选穴位于大鼠双侧肋弓下,距髂嵴10 mm,非穴位,且不属于中医理论中的任何经络,操作同治疗组。每日1次,每周治疗6天,休息1日,总疗程28天。正常组及模型组同样进行抓取固定及气麻30分钟,但不做任何治疗。于第五周开始进行行为学检测,行为学检测的顺序依次为旷场实验,Morris水迷宫及条件性恐惧实验,行为学检测结束后次日将所有大鼠处死并取材,通过Western Blot,免疫组织化学及免疫荧光等实验研究海马区p-tau(s396)、p-tau(s404)及A β的分布形态及其相对蛋白表达,通过WB实验观察Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白GSK-3 β、β-Catenin、LRP5、LEF1及其相对蛋白表达等指标在海马区的表达。结果:1.在旷场实验中,与正常组比较,模型组和非穴组活动距离显著增加(P<0.05),中央格时间显著增加(P<0.05),穿越中央区次数明显减少(P<0.05),直立次数明显减少(P<0.05);与模型组和非穴组相比,智三针组活动距离明显减少(P<0.05),中央格时间明显减少(P<0.05),穿越中央区次数明显增多(P<0.05),直立次数明显增多(P<0.05);与正常组比较,其余三组修饰次数均减少(P<0.05);与模型组和非穴组相比,智三针组修饰次数稍有增多,但结果无统计学意义(P>0.05);非穴组与模型组相比,各项指标均无明显差异。2.在Morris水迷宫实验中,四组大鼠在前5天的定位航行实验中,与正常组比较,模型组和非穴组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05),平均逃避距离明显增加(P<0.05);与模型组和非穴组比较,智三针组平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),平均逃避距离明显降低(P<0.05);与模型组比较,非穴组平均逃避潜伏期及平均逃避距离无明显差异(P>0.05)。在第6天的空间探索实验中,与正常组比较,模型组大鼠首次跨越平台的时间延长(P<0.05),跨越平台次数明显减少(P<0.05),目标象限内游泳距离百分比及目标象限内游泳时间百分比均明显减少(P<0.05);与模型组和非穴组比较,智三针组大鼠首次跨越平台的时间减少(P<0.05),跨越平台次数明显增多(P<0.05),目标象限内游泳距离百分比及目标象限内游泳时间百分比均明显增多(P<0.05);与模型组比较,非穴组水迷宫各项指标均无显著差异(P>0.05)。3.条件性恐惧实验结果显示,在条件恐惧记忆测试期间,正常组僵直时间有明显升高趋势,模型组与非穴组僵直时间无明显趋势,而智三针组在第4次白噪音刺激后有轻微下降,而后升高,有一定升高趋势。与正常组比较,其余三组僵直时间明显降低,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,智三针组的僵直反应时间较高,但两者比较无统计学差异(P>0.05)。4.智三针对AD大鼠海马组织p-tau(s396)、p-tau(s404)和Aβ的影响:与正常组比较,模型组海马区p-tau(s396)、p-tau(s404)和Aβ蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组和非穴组比较,智三针组能显著下调p-tau(s396)、p-tau(s404)和Aβ蛋白的表达(P<0.05);与模型组比较,非穴组海马区p-tau(s396)、p-tau(s404)和Aβ蛋白表达无显著差异(P>0.05)。5.智三针对AD大鼠海马组织GSK-3 β,β-Catenin、LRP5和LEF1的影响:与正常组比较,模型组海马区GSK-3 β蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组和非穴组比较,智三针组能显著下调GSK-3 β蛋白的表达(P<0.05);与模型组比较,非穴组海马区GSK-3 β蛋白表达无显著差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组海马区的β-Catenin、LRP5和LEF1表达明显减少(P<0.05);与模型组和非穴组比较,智三针组β-Catenin、LRP5和LEF1表达量明显增加(P<0.01);与模型组比较,非穴组海马区β-Catenin、LRP5和LEF1蛋白表达无显著差异(P>0.05)。结论:1.智三针可有效改善AD模型大鼠发病过程中的行为学异常,通过旷场实验发现智三针组可有效改善AD大鼠对新环境的认知能力、探索行为及兴奋性,同时可减少其的异常活动和紧张度。Morris水迷宫实验发现智三针可有效改善AD大鼠的空间学习能力和学习记忆能力。在条件恐惧记忆测试中,智三针组与模型组比较大鼠恐惧记忆的获得有提高的趋势,但两者之间未出现明显差异,说明智三针在一定程度上可改善大鼠恐惧记忆能力的损伤,但仍需要加大样本量对其作用进行研究。2.智三针可以通过上调β-Catenin、LRP5和LEF1的表达,抑制GSK-3 β活化,从而促进Wnt/β-Catenin信号通路传导,达到改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用。3.智三针可能通过促进Wnt/β-Catenin信号通路传导,从而间接下调p-tau(s396)及p-tau(s404)的表达,减少Aβ沉积,减轻神经毒性的破坏作用,达到改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用,延缓AD的发生发展。