紫茎泽兰(Eupatorium aderwphorum Spreng或Ageratina adenophora Spreng)大约于40年代从中缅边境传入云南省,现已在云南、四川、贵州、广西和西藏有广泛的分布,已成为危害我国最为严重的外来入侵物种之一。对本地植物带来灾难性的危害,给畜牧业带来不可估量的损失,同时破坏了生态平衡,目前尚无有效的防除方法。本试验旨在从紫茎泽兰中提取主要毒素9-羰基-10,11-去氢泽兰酮(euptox A),构建一种高效快速的提取方法；研究euptox A的杀螨活性、抗肿瘤活性,以期能筛选出紫茎泽兰主要毒素的有益生物活性,为探索紫茎泽兰新生源奠定理论基础,同时也为寻找防治、利用紫茎泽兰的新方法提供依据。其研究内容如下：1.紫茎泽兰主要毒素euptox A的提取、分离及纯化流程：甲醇超声提取,乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析,薄层色谱法(TLC)初步筛选,上D101大孔树脂柱洗脱,粗品反复硅胶柱层析。高效液相色谱检测,结果表明euptox A提取样品其纯度可达到98%以上。2.采用互补双对数(CLL)模型分析euptox A对兔痒螨和兔疥螨的体外毒性。结果显示：euptox A对兔痒螨和兔疥螨都有很强的杀灭效果。Euptox A在浓度3 mg/mL和4mg/mL时在4h内能够杀死所有的疥螨,而在4mg/mL时也可在4h内杀死所有的兔痒螨。在euptox A浓度为2mg/mL、3 mg/mL和4 mg/mL时对兔疥螨的半数致死时间(LT50)分别为0.687h、0.526h、0.326 h。Euptox A浓度为3 mg/mL和4mg/mL时对兔痒螨的LTso分别为0.693 h和0.493h。EuptoxA在2h内兔疥螨和兔痒螨的半数致死浓度(LC50)分别为1.068mg/mL、0.902mg/mL。结果表明,euptox A具有较强的杀螨活性,有潜力作为动物杀螨的新药物。3.采用MTT比色法测定euptox A体外抗肿瘤活性,以人肺腺癌细胞系A549、人宫颈癌细胞系HeLa和人喉表皮癌细胞系Hep-2为靶细胞,并采用膜联蛋白V-FITC/PI双染色法用流式细胞仪和荧光定量PCR测定HeLa细胞凋亡周期及相关凋亡基因的表达。结果显示：euptox A对体外培养的三株肿瘤细胞都有不同程度的抑制作用。不同euptox A浓度(0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL和2mg/mL)对三株肿瘤细胞的抑制作用差异显著(P<0.05或P<0.01)。随着浓度的增加抑制率增加,对A549.HeLa和Hep-2三株肿瘤细胞系的半数抑制浓度(IC50)分别为369μg/mL、401μg/ML和427μg/mL。流式细胞仪检测结果显示：euptox A处理组处于S期的细胞数量与阴性对照组比较差异性显著(P<0.05或P<0.01),并呈一定的量效关系,说明euptox A阻滞细胞于S期,使HeLa细胞发生S阻滞的生物学效应,从而起到抗肿瘤作用。荧光定量PCR结果显示：euptox A能促进HeLa细胞中caspase-10 mPNA表达上调,但不呈现剂量依赖性,随着euptox A剂量增加,caspase-10 mRNA表达量表现为先增加、后减少,在质量浓度30μg/ML时,caspase-10 mRNA表达量最大,为对照组mRNA表达量的4.12倍,但不同浓度的euptox A对caspase-3 mBNA表达量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。