养阴健脾散毒方对人胃癌SGC-7901、MGC-803细胞株作用的实验研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aishangliuning
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目的1.通过研究养阴健脾散毒方水提物作用于胃癌SGC-7901细胞、MGC-803细胞所产生的特异性生物学作用,从调控肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡、周期、血管生成及相关基因mRNA、蛋白表达水平等方面探讨养阴健脾散毒方抗肿瘤机制。2.为胃癌治疗临床用药提供客观依据,为研究抗肿瘤中药有效成分的作用机理提供新思路,从点到面深入探索。方法制备养阴健脾散毒方水提物,体外培养胃癌SGC-7901细胞、MGC-803细胞,通过CCK8实验检测养阴健脾散毒方水提物对胃癌SGC-7901细胞及MGC-803细胞的增殖水平影响,划痕法检测细胞迁移能力变化,流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测细胞凋亡情况,RT-qPCR及Western Blot实验检测养阴健脾散毒方水提物干预后两种细胞内的Bax、Bcl-2、P53、Caspase3、CDK4、Vegf基因mRNA及蛋白的表达水平。结果1.养阴健脾散毒方水提物对胃癌SGC-7901细胞及MGC-803细胞呈现出剂量依赖性和时间依赖性的增殖抑制作用(P<0.01),取养阴健脾散毒方水提物作用于两种细胞48小时后的半数抑制率(IC50)进行后续实验,SGC-7901细胞的IC50为0.551%,MGC-803细胞的IC50为0.506%;2.划痕实验结果显示:养阴健脾散毒方水提物呈时间依赖性抑制SGC-7901细胞、MGC-803细胞的迁移水平(P<0.05);3.流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)结果显示:实验组SGC-7901细胞、MGC-803细胞的凋亡率较对照组均显著升高(P<0.05);4.RT-qPCR法结果显示:实验组SGC-7901细胞Bax、Caspase3、Vegf基因mRNA的表达水平上调,Bcl-2、P53、CDK4基因mRNA的表达水平下调(P<0.05);实验组MGC-803细胞的Bax、Caspase3、P53、Vegf基因mRNA的表达水平上调,Bcl-2、CDK4基因mRNA的表达水平下调(P<0.05):5.Western Blot结果显示:实验组SGC-7901细胞和MGC-803细胞的Bax、P53蛋白表达水平显著上调,Pro-Caspase3蛋白表达轻微下调,Cleaved-Caspase3蛋白水平显著上调,Bcl-2、CDK4、Vegf蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论养阴健脾散毒方可以抑制胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞的增殖,减弱其迁移能力,并促进细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与其干预Bax、Bcl-2、P53、Caspase3、CDK4、Vegf基因mRNA及蛋白水平的表达相关。
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