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目的本实验是在制备锂-匹罗卡品诱发癫痫模型的基础上,探讨miR-9是否参与颞叶癫痫的发生、发展过程；miR-9是否参与托吡酯(TPM)抑制颞叶癫痫大鼠海马神经元凋亡的过程；TPM是否通过调节bcl-2蛋白与bax蛋白的比值来抑制神经元的凋亡。方法1.实验动物及分组：健康的成年雌性及雄性SD大鼠,随机分为4组：1)正常对照组(n=20),2)颞叶癫痫组(n=20),3)TPM低剂量组(n=20),4)TPM高剂量组(n=20)2.癫痫模型的制备及干预：使用锂-匹罗卡品诱发癫痫,模型动物需达到Ⅳ级以上发作,并持续50分钟以上。对正常对照组和颞叶癫痫组大鼠每日1次生理盐水40mg/kg灌胃。对TPM低剂量组每日1次TPM40mg/kg灌胃。对TPM高剂量组每日1次80mg/kg灌胃。3.取材及实验测定：通过芯片分析及实时定量PCR测定上述四组大鼠海马中miR-9的差异性表达；通过蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法测定上述各组海马组织中bcl-2蛋白与bax蛋白的比值变化；通过HE染色观察各组大鼠海马组织中细胞的形态学改变。结果1.miRNAs芯片分析结果：与正常对照组相比,癫痫组中有12个miRNAs(miR-207,-204,-466,-511,-2964,-3581,-764,-214,-210,-351,-466,-298)是上调的,且有28个miRNAs(miR-9,-101,-136,-872,-154,-153,-382,-362,-377,-337,-380,-218,-219,-31,-383,-499,-33,-34,-376,-300,-19,-592,-186,-488,-598,-30,-582,-708)是下调的。TPM低剂量及高剂量组中12个上调的miRNAs则出现了下调,28个下调的miRNAs则发生了上调。其中miR-9是上调较明显的miRNAs之一。2.实时定量PCR结果：与正常对照组相比,miR-9在癫痫组(SE)中下调明显(P<0.05)。与癫痫组(SE)相比,miR-9在TPM高剂量(TH)组明显上调(P<0.05)。其余组间比较均无明显差异(P>0.05)。3.蛋白免疫印迹法结果：癫痫组的大鼠海马组织中bax蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.01),而TPM治疗组中bax蛋白表达均下降(P<0.05),且TPM高剂量组比TPM低剂量组下降的更明显(P<0.05)。癫痫组的海马组织中bcl-2蛋白的表达明显低于正常对照组(P<0.05),TPM治疗组中bcl-2蛋白表达均升高,且TPM高剂量组比TPM低剂量组升高的更明显(P<0.05).Bcl-2、bax比值示癫痫组明显低于正常对照组(P<0.01),与癫痫组相比,TPM治疗组中bcl-2/bax比值均升高,且TPM高剂量组比TPM低剂量组升高的更明显(P<0.01)。4.免疫组化结果：癫痫组中bax+蛋白表达明显多于正常对照组(P<0.01):TPM治疗组的bax+蛋白表达与癫痫组相比减少明显,其中TPM高剂量组较TPM低剂量组减少更为明显(P<0.05)。癫痫组中bcl-2+表达略低于正常对照组(P>0.05):TPM治疗组中的bcl-2+蛋白表达与癫痫组相比明显升高(P<0.01):TPM低剂量组与TPM高剂量组之间比较差异不明显(P>0.05)。正常对照组与癫痫组相比bcl.2+/bax+比值明显升高(P<0.01):TPM治疗组与癫痫组相比bcl.2+/bax+比值均明显升高(P<0.05):TPM高剂量组与TPM低剂量组相比较bcl.2+/bax+明显升高(P<0.05)5.HE染色结果：正常对照组中可见细胞数量较多,细胞形态规整,排列整齐紧密；相反,大鼠海马组织癫痫组、TPM治疗组均可见海马CA3区大锥体细胞、DG区颗粒细胞及CA1区小锥体细胞数量减少,细胞形态不规整,间隙明显增大,排列紊乱,部分细胞核消失；癫痫组较TPM治疗组明显加重；治疗组中TL组较TH组细胞数量有所增加,细胞排列情况及数量有所改善。结论1.MiR-9在颞叶癫痫的发生发展过程中起抑制作用,且TPM可上调miR-9的表达。2.TPM通过调节bcl-2及bax蛋白来抑制颞叶癫痫海马神经元中部分凋亡的发生。