嗜热微生物菌株多相分类学研究及菌株资源批量化筛选方法的建立

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利用纯培养方法,对位于我国新疆吉木萨尔县的古海温泉进行嗜热细菌的分离和纯化,共分离得到9株细菌。基于16S rRNA基因序列分析和比对结果表明,其中3株菌属于短杆菌属Brevibacterium,且都与细菌Brevibacterium halotolerans的16S rRNA序列相似度达到100%。另3株菌的16S rRNA序列一致性为100%,选取其中一株细菌GU51T作为研究对象,通过EzTaxon-e网站的在线比对工具进行比对,其与细菌Thermovum composti的相似度最高且只为92.5%。剩下3株菌的16S rRNA序列一致性也为100%,选取其中一株细菌GU4T作为研究对象,通过在线比对,其与细菌Chelativorans multitrophicus的相似度最高且只为96.8%。本论文对菌株GU4T作了部分多相分类学研究,对菌株GU51T进行了全部的多相分类学研究。  对分离于四川省普格县普格温泉中的疑似新种3nP4T进行了多相分类学研究。菌株3nP4T为革兰氏阳性严格好氧菌,有鞭毛、产末端芽孢。最适生长温度为57-60℃,生长pH范围为pH7.0-7.5,NaCl耐受范围为0-0.5%(w/v)。菌株3nP4T的主要极性脂为双磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和一个无法确定的磷脂。iso-C15∶0和iso-C17∶0是其主要脂肪酸。菌株3nP4T为低G+C革兰氏阳性细菌Ⅺ类聚群成员,其基因组DNA G+C mol%为39.2±0.95 mol%。根据对其多相分类学研究证实其为Anoxybacillus属一个新的物种,将其命名为Anoxybacillus vitaminiphilus sp.nov.。  在对细菌进行多相分类学研究的基础上,为进一步研究细菌在生产应用等各个方面的功能,初步搭建出了菌株批量化筛选平台。利用实验室现有的菌种资源,通过菌株活化、转接、96孔板批量冻干保藏、96孔板菌株复活验证其活性比率等步骤,获得96孔板批量冻干保藏菌株(470株菌,25个96孔板)。在其基础上进行了产碱性淀粉酶活性菌株的筛选以及具有抗癌活性的菌株筛选的研究工作,也为以后进行其他相关活性功能菌的筛选奠定了基础。
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