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目的 先天性巨结肠(HirschsprungsdiseaseHD)又称肠无神经节细胞症(Aganglionosis),该病是小儿消化道畸形的常见病。HD的病理改变是病变肠壁内粘膜下层及肌层内缺乏神经丛或神经节细胞导致病变肠段无法松弛和失去正常蠕动,使病变肠段始终处于痉挛状态,不能正常地将病变近端肠内容排入病变肠段中,临床上表现为腹胀、顽固性便秘,严重影响生长发育。 手术切除HD病变肠管是根治该病的方法,其术后效果主要决定病变肠管的彻底切除,因此术中正确的病变肠管判定至关重要,传统术中诊断方法为冰冻切片行HE染色,这种方法其时间大约在30分钟左右,而且这种方法对神经节细胞的辨认需要有资深经验的病理医生来诊断,一些病例因此术中需做多次冰冻切片才能做出病理诊断,耗时更长,而且冰冻HE染色与石蜡HE染色不能达到100%的符合。有些病例因此导致切除不充分而需二次或多次手术。给患儿造成巨大损害,也容易导致医疗纠纷。NADPH-d冰冻切片染色法是一种较快的神经节细胞染色法,对神经节细胞有特异呈色,神经节细胞的显染后易于辨认。本研究利用NADPH-d冰冻切片染色法应用于巨结肠的术中冰冻切片染色行术中快速病理诊断并于传统冰冻HE染色进行比较研究,分析NADPH-d冰冻切片染色法在巨结肠术中快速病理诊断的作用和特点,为寻找更加快速及准确的巨结肠术中诊断方法提供新的途径。 方法 一、标本与分组 60例经石蜡切片HE染色病理确诊的先天性巨结肠患儿的术中切除肠管包括痉挛段、正常段肠管(来源于中国医科大学盛京医院新生儿外科,并获得医院伦理委员会认可[no.2012PS80K]),全部标本术中均行冰冻HE染色,应用盲法将标本行NADPH-d冰冻切片染色。 二、实验试剂 0.1mol/LPB(pH=8.0);NADPH-d(Simga); NBT(Simga);二甲基亚砜; Triton(X)-100 三、实验方法 患儿术后石蜡切片HE染色病理检查诊断为最终诊断标准,分别用NADPH-d快速染色法与传统冰冻切片HE快速染色法进行比较研究,统计诊断时间,诊断率,分析前者的特点,两种不同处理组间比较采用配对x2检验,以P<0.05为差异有统计学意义,再随机取NADPH-d染色片子(正常段)进行HE染色(双重染色)。 结果 本组60例病例中NADPH-d染色正常肠段阳性57例,阴性3例,全部痉挛肠段无阳性结果;冰冻HE染色下常肠管全部为阳性结果,痉挛段肠管全部为阴性结果。经统计学分析,两种方法阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。经计算NADPH-d染色染色时间为15分钟,明显小于冰冻HE染色时间(30分钟),经统计学分析,有统计学意义。神经节细胞在NADPH-d冰冻切片呈紫色胞浆,核呈空泡状容易确认。 结论 1、快速冰冻NADPH-d染色法可应用于巨结肠术中快速病理诊断,结果可靠。 2、冰冻NADPH-d染色法可用于巨结肠术中判定正常肠管的界定且可信。 3、统术中快速冰冻HE染色比较具有辨认神经节细胞更加容易,识别性好,易于掌握之特点。 4、NADPH-d染色法较冰冻HE染色法具有操作步骤少,时间快速之优点。