青蒿琥酯对实验性脉络膜新生血管的作用及机制研究

来源 :中国中医科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ustczhy
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目的:观察中药单体青蒿琥酯(artesunate,ART)对BN大鼠实验性脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的干预作用,以及对缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular en dothelial growth factor,VEGF)相对分子表达量的影响,初步探讨青蒿琥酯干预CNV进展的作用机制。方法:1.模型建立:应用532 nm激光机(360 mW,50 μm,0.1 s)围绕BN大鼠视盘光凝一周,建立CNV动物模型。2.分组及给药:随机将BN大鼠分为正常组、模型组、康柏西普组(康柏西普5 μL,1次)、ART常规剂量组(10.08 mg/kg·d)和ART高剂量组(20.16 mg/kg·d),分别给予不同的措施干预,共计14 d。3.眼底影像学检查:运用眼底荧光素血管造影法(Fundus fluorescein angi ography,FFA)观察CNV荧光素渗漏情况。在光凝后7 d、14 d两个时间节点,各组取4只BN大鼠行眼底FFA检查,并分别取8张照片,计算渗漏光斑区的平均光密度值(Mean Density,MD)值,评价CNV荧光素渗漏情况。4.组织病理学观察:运用HE染色法观察视网膜脉络膜组织病理学变化。在光凝后7 d、14 d两个时间节点,各组取4只眼球制备病理切片行HE染色,并分别取8张激光斑中央区切片,于X200倍光学显微镜下拍摄图像,测量CNV中央厚度。5.分子生物学检测:运用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测视网膜脉络膜中HIF-1 α和VEGF蛋白表达水平。在光凝后7 d、14 d两个时间节点,每组各取4只眼球分离视网膜脉络膜复合体行WB检测,并计算各目标条带光密度值(Optical density,OD)值与内参照OD值之比。结果:1.CNV发生率:(1)光凝后7 d模型组CNV发生率为71.9%,康柏西普组62.1%,ART常规剂量组67.7%,ART高剂量组63.0%。(2)光凝后14 d模型组CNV发生率为86.7%,康柏西普组71.0%,ART常规剂量组75.0%,ART高剂量组72.4%。2.青蒿琥酯对CNV荧光素渗漏的影响:(1)光凝后7 d各组间MD值相比较,康柏西普组(84.82±6.61)MD值最低,其次是ART高剂量组(97.52±4.45)(P<0.05)。(2)光凝后14 d各组间MD值相比较,由低到高依次为康柏西普组(78.58±8.46)、ART高剂量组(96.92±6.18)、ART常规剂量组(118.38± 11.36)、模型组(132.48±10.48),差异有统计学意义(P<0.05)。(3)光凝后7 d与14 d MD值相比较,模型组7 d低于14 d,差异有统计学意义(P<0.05)。3.青蒿琥酯对CNV组织病理学变化的影响:(1)光凝后7 d各组间CNV厚度值相比较,由低到高依次为康柏西普组(26.57±3.01)、ART高剂量组(31.13±2.72)、ART 常规剂量组(36.76±4.33)、模型组(42.26±4.29),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)光凝后14 d CNV厚度值相比较,由低到高依次为康柏西普组(33.85±3.56)、ART高剂量组(39.42±3.17)、ART常规剂量组(45.97±4.11)、模型组(54.32±5.11),差异有统计学意义(P<0.05);(3)光凝后7 d至14 d,各组CNV厚度值均增加,组内比较差异有统计学意义(P<0.05)。4.青蒿琥酯对HIF-1 α和VEGF蛋白表达水平的影响:(1)HIF-1 α相对蛋白表达量:光凝后7 d与正常组(0.10±0.01)相比,各组HIF-1 α表达量升高(P<0.05);与模型组(0.70±0.04)相比,各治疗组表达量降低(P<0.05);与康柏西普组(0.24±0.06)相比ART常规剂量组(0.36±0.03)及高剂量组(0.35±0.03)表达量升高(P<0.05)。光凝后14d与正常组(0.09±0.02)相比,各组HIF-1 α表达量升高(P<0.05);与模型组(0.64±0.05)相比,各治疗组表达量降低(P<0.05);与康柏西普组(0.25±0.03)相比ART常规剂量组(0.39±0.04)及高剂量组(0.38±0.03)表达量升高(P<0.05)。(2)VEGF相对蛋白表达量:光凝后7 d与正常组(0.26±0.09)相比,各组VEGF表达量升高(P<0.05);与模型组(1.45±0.09)相比,各治疗组表达量降低(P<0.05);与康柏西普组(0.57±0.05)相比ART常规剂量组(0.93±0.11)及高剂量组(0.84±0.08)表达量升高(P<0.05)。光凝后14 d与正常组(0.25±0.07)相比,各组VEGF表达量升高(P<0.05);与模型组(1.32±0.15)相比,各治疗组表达量降低(P<0.05);与康柏西普组(0.48±0.11)相比ART常规剂量组(0.88±0.10)及高剂量组(0.84±0.04)表达量升高(P<0.05)。结论:1.青蒿琥酯能够抑制实验性脉络膜新生血管的形成和发展。2.青蒿琥酯通过下调实验性脉络膜新生血管形成早期HIF-1 α、VEGF的表达抑制血管生成。3.青蒿琥酯可作为治疗CNV的有效药物,为临床提供新的方向。
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