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研究背景胰岛素抵抗与许多重大疾病的发生和发展密切相关。肝脏胰岛素抵抗是胰岛素抵抗的一个重要组成部分。奥氮平是代表性的新型抗精神病药物可引起肝脏胰岛素抵抗,但其作用机理未明。龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan Tang,LXT)是中医经典古方。中医近年古方新用,用治与肝脏胰岛素抵抗密切相关的精神疾病和糖脂代谢障碍,疗效颇佳,但其作用机理未明。目的在研究奥氮平所致肝脏胰岛素抵抗的病理机制基础上,探讨加减LXT(Modified LXT,mLXT)对胰岛素抵抗的作用及其机理,为LXT改善肝脏胰岛素抵抗相关疾病提供科学依据。方法1、mLXT的制备按《中国药典》要求,选取有关中药材,经鉴定后制备mLXT浸膏粉,并用高效液相色谱法定量分析其主要活性成分,含量合格后使用。2、模型的构建及用药雄性大鼠,随机分为四组:对照组、模型组、奥氮平+mLXT低剂量(50 mg/kg)组和奥氮平+mLXT高剂量(500 mg/kg)组。经口给予奥氮平(5 mg/kg)造模,(正常对照组给予5%阿拉伯胶溶液。二小时后mLXT组灌胃给予不同剂量的mLXT),每天各一次,连续8周。期间每天记录大鼠体重和饲料消耗量,第7周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),并测定有关血液生化指标,第8周处死动物,收集肝脏组织供检测肝脏脂质沉积和基因/蛋白表达用。3、有关参数的检测血液生化指标及肝脏脂质含量用酶法或ELISA法测定,并计算HOMA-IR和Adipo-IR指数。HE染色后检查肝脏病理变化,油红O染色后用ImageJ软件测量脂滴沉积情况。RT-PCR或/和Western blot分析肝脏相关基因及蛋白的表达。结果1、奥氮平升高空腹血浆INS、HOMA-IR、肝脏组织TG含量及油红染色面积(P<0.05),提示奥氮平引起大鼠肝脏胰岛素抵抗和脂肪肝。mLXT高剂量改善以上异常,提示mLXT对肝脏胰岛素抵抗及脂肪肝的疗效。2、奥氮平上调肝脏IRS-1 Ser307、IRS-2Ser731、PI3Kp85α Tyr607、Akt Ser473和mTORSer2448位点的蛋白磷酸化及其与总蛋白表达比率(P<0.05)。mLXT高剂量抑制奥氮平所致的这些蛋白磷酸化及比率的增高(P<0.05)。结果提示,奥氮平通过IRS/PI3K/Akt/mTOR信号通路引起肝脏胰岛素抵抗,而mLXT调控这一信号通路。3、奥氮平激活转录因子SREBP-1c及其下游基因ACC-1、FAS、SCD-1 mRNA的表达(P<0.05),而mLXT高剂量改善以上信号的异常。结果提示,奥氮平通过激活肝脏SREBP-1c信号通路引起与肝脏胰岛素抵抗密切相关的脂肪肝,而mLXT调控这一信号通路。4、此外,mLXT高剂量上调PPAR-α mRNA和蛋白及其下游基因CPT-1a和ACO mRNA的表达(P<0.05)。同时,mLXT高剂量还增加AMPK-α Thr172位点磷酸化蛋白的表达和AMPK-α Thr172与AMPK-α总蛋白的比率(P<0.05)。结果提示,mLXT改善脂肪肝还与调控肝脏AMPK-α/PPAR-α信号通路有关。结论1、奥氮平通过IRS/PI3K/Akt信号轴导致大鼠肝脏胰岛素抵抗。2、mLXT通过调控IRS/PI3K/Akt信号通路,改善大鼠肝脏胰岛素抵抗。3、mLXT尚可通过AMPK-α/PPAR-α信号通路改善奥氮平所致脂肪肝。