论文部分内容阅读
目的:探讨PLCE1在食管鳞癌、癌旁正常组织中的表达及临床意义;下调PLCE1基因对食管鳞癌细胞增殖和侵袭调控的影响。方法:收集100例汉族食管鳞癌组织及与其对应的99例癌旁正常组织,应用免疫组化Envision法检测PLCE1蛋白表达,并分析其与食管鳞癌临床病理参数及与食管鳞癌患者预后的关系;用PLCE1特异性的si RNA转染食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706,应用q RT-PCR、Westem blot及免疫荧光检测si RNA对食管鳞癌细胞PLCE1的干扰效率;转染48小时后,MTT法和单克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;Westem blot检测与凋亡相关蛋白及上皮间叶转化相关标记物的蛋白表达情况。结果:(1)PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,并且发现PLCE1高表达与临床TNM分期及淋巴结的转移有关,且PLCE1高表达组比低表达组预后差。(2)选择转染效率高的2条PLCE1-si RNA混合后转染食管鳞癌细胞,q RT-PCR、Westem blot及免疫荧光显示,将这两条si RNA混合后转染食管鳞癌细胞均能抑制PLCE1 m RNA和蛋白的表达量,转染PLCE1-si RNA48小时后,MTT实验结果显示转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比,实验组细胞的增殖受到明显抑制,单克隆形成实验显示实验组的细胞团数明显减少,流式细胞术实验显示经过PLCE1-si RNA转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比,早期和晚期凋亡的比率明显升高,利用Westem blot进一步检测凋亡相关分子Bax,BCL-2和cleaved-PARP的蛋白表达情况,结果显示沉默了PLCE1基因的食管鳞癌细胞株中促凋亡蛋白Bax和凋亡标记物cleaved-PARP的蛋白表达量明显增高,而抗凋亡蛋白BCL-2蛋白的表达量明显降低。Transwell实验显示,与对照组相比,转染PLCE1-si RNA的食管鳞癌细胞株的侵袭能力明显降低;Westem blot检测上皮间叶相关标记物,结果发现,PLCE1基因被干扰后,其上皮的标记物E-cadherin明显升高,而间叶的标记物Vimentin则明显下降。结论:(1)PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁正常组织,PLCE1蛋白的高表达与食管鳞癌的淋巴结转移和TNM分期有关,且其高表达与食管鳞癌患者预后差密切相关。(2)下调PLCE1基因可抑制食管鳞癌细胞的增殖,促进食管鳞癌细胞的凋亡,提示PLCE1可能参与食管鳞癌细胞的增殖调控;下调PLCE1基因可显著抑制食管鳞癌细胞的侵袭,并且可能通过调控上皮间叶转化来调控食管鳞癌细胞的侵袭转移。