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第一部分:循环非编码RNAs与乳头状甲状腺癌肺转移灶碘-131摄取功能及预后的相关性研究研究目的最新研究表明:循环长链非编码Lnc RNAs（Long non-coding RNAs:Lnc RNAs）作为一种简单有效、非侵袭性的生物标志物在鉴别诊断良恶性肿瘤、预测恶性肿瘤转移或复发、评估肿瘤治疗疗效及预后等方面具有重要临床价值。然而与乳头状甲状腺癌（Papillary thyroid carcinoma:PTC）肺转移碘-131(131I)摄取及预后相关的生物标志物研究至今仍未见报道。本研究通过筛选和验证PTC肺转移灶131I摄取阳性组及131I摄取阴性组血浆差异表达Lnc RNAs,以评价循环Lnc RNAs预测PTC肺转移灶131I摄取功能及预后的临床价值。研究方法本研究收集在我科行131I治疗的204例PTC肺转移患者血浆作为研究对象;依据PTC肺转移灶是否具有131I摄取功能分为两组:131I摄取阳性组和131I摄取阴性组;首先通过配对法选取131I摄取阳性组和131I摄取阴性组患者血浆各5例;利用Aaystar Lnc RNA芯片3.0检测两组血浆中Lnc RNAs的表达谱差异,并对差异表达Lnc RNAs进行聚类和统计学分析;然后,通过实时定量荧光PCR（Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）法在剩余患者血浆样本中对差异表达Lnc RNAs进行验证,以发现最有价值的Lnc RNAs;最后,利用Kaplan–Meier法分析循环Lnc RNAs作为循环肿瘤标志物评价PTC肺转移患者预后的临床价值。研究结果基因芯片分析发现:相比于肺转移灶131I摄取阳性组,在131I摄取阴组血浆中,共有1006种Lnc RNAs表达上调,705种Lnc RNAs表达下调（P<0.05和差异倍数>2倍具有统计学意义）;随后,通过q RT-PCR对芯片结果进行验证,发现Lnc RNAs（ENST00000462717和ENST00000415582）在131I摄取阴性组患者血浆中的表达明显上调,而Lnc RNAs（TCONS00024700和NR028494）在131I摄取阴性组中的表达明显下调（P<0.05）。采用受试者工作特征（Receiver operating characteristic:ROC）曲线分析显示:Lnc RNAs（ENST00000462717、ENST000004155824 TCONS00024700和NR028494）预测PTC肺转移灶131I摄取阴性组的敏感性和特异性的最佳切点分别是432、328、34和42;曲线下面积（Area under the curve:AUC）分别是0.890、0.936、0.975和0.918。生存分析显示:高表达Lnc RNAs（ENST00000462717和ENST00000415582）的PTC肺转移患者10年生存率较差,而高表达Lnc RNAs（TCONS00024700和NR028494）的PTC肺转移患者10年生存率相对较好（P<0.001）。研究结论本研究结果提示,循环Lnc RNAs ENST00000462717、ENST00000415582、TCONS00024700和NR028494可作为简单有效、非侵袭性血浆肿瘤标志物预测PTC肺转移灶131I摄取功能及患者预后,对于指导DTC术后碘-131治疗具有潜在临床价值和应用前景。Lnc RNAs作为稳定的PTC血浆肿瘤标志物的临床价值还需前瞻性大样本临床试验进一步验证。第二部分:CTC与分化型甲状腺癌远处转移、碘-131难治性状态及预后的相关性研究研究目的循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell:CTC）作为一种全新的肿瘤标志物已在多种肿瘤的辅助诊断、术后随访、复发监测、微转移灶的早期发现、疗效及预后评估、个体化诊疗等方面已开展广泛的临床研究。然而,传统的阳性富集法（Cell Search系统）检测DTC远处转移患者外周血CTC的敏感性较低;本研究使用阴性富集法检测DTC患者的外周血CTC数目,并探讨CTC数目与DTC远处转移患者临床病理特征及预后的相关性。研究方法本研究共纳入了72例DTC患者;抽血前所有入组患者均未行131I治疗;抽取DTC远处转移患者外周血7.5ml用于CTC的检测;使用免疫磁珠阴性富集法联合免疫荧光原位杂交技术检测CTC的数目。肿瘤细胞的判定标准:检测恶性肿瘤细胞细胞核数目异常或检测到上皮粘附因子（Epithelial cell adhesion molecule:Ep CAM）。研究结果在72例DTC患者中,可检测出CTC者62例（86.11%）,共检出CTC数目527个。受试者工作特征（Receiver operating characteristic:ROC）曲线显示:诊断DTC远处转移的CTC最佳切点数目为4.5,此时的敏感性为64.3%,特异性为83.8%,AUC为0.789,95%置信区间（CI）为:0.685–0.893。伴远处转移的DTC患者检出CTC的平均数目明显高于不伴远处转移的DTC患者和正常对照组者。不伴远处转移DTC患者检出CTC平均数明显高于正常对照组（P=0.0016、P<0.001和P<0.001）。单因素及多因素分析显示:预测DTC远处转移的最佳切点值为CTC数目≥5。ROC曲线显示:诊断131I难治性分化型甲状腺癌（Radioiodine-refractory differentiated thyroid cancer:RR-DTC）的CTC最佳切点数目为6.5,此时的敏感性为73.7%%,特异性为69.6%,AUC为0.781,95%CI为:0.635–0.928。单因素及多因素分析显示:CTC预测RR-DTC的最佳切点值为CTC数目≥7。生存分析显示:当CTC数目≥7时,DTC患者的无进展生存期（Progression-free survival:PFS）明显缩短;Cox’s风险模型分析显示:CTC数目≥7可作为独立预后因子预测DTC远处转移患者的预后。研究结论本研究结果提示,CTC数目≥5与DTC患者的远处转移存在明显相关性,CTC数目≥7与DTC患者出现131I难治性状态及预后存在明显相关性。CTC检测用于指导DTC术后131I治疗及评估相预后具有潜在临床价值和应用前景,后续的前瞻性大样本多中心临床研究有利于进一步验证本研究结果。