拟南芥Atmap18基因启动子的分析

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Atmap18(At5944610)是从拟南芥基因组中分离得到的一个基因,其开放阅读框编码168个氨基酸,有8个类似MAP18微管结合域的WEKKN/EE不完全特征重复序列,推测其为一个微管结合蛋白。为了研究AtMAP18的基因表达模式,分组织提取了哥伦比亚野生型拟南芥的总RNA,Northern blot杂交结果显示:AtMAP18主要在根和花中表达。 用生物信息学网站植物顺式作用元件数据库PLACE数据库分析启动子元件,根据元件的分布,初步将其划分为5个区段,设计四对引物(加有BamHI、HindⅢ酶切位点),构建了四个不同长度的片段(1697bp、1176bp、805bp和401bp)与报告基因GUS连接的植物表达载体,分别命名为oBI1697G、pBI1176G、pBI805G和pBI401G。用农杆菌介导的花序转化法转化拟南芥,提取转化后植株的基因组DNA,PCR(GUS基因的扩增)、点杂交证明外源基因稳定整合到拟南芥的基因组中。GUS组织化学染色分析表明,不同的植物组织部位,GUS基因的表达活性存在较大的差异。转化pBI1176G载体的拟南芥只有在花粉中有较弱的GUS表达,而在转化pBI401G载体的拟南芥中却没有任何组织有GUS表达,转化其余两个载体的转基因植株只在子叶、成熟花粉和部分根中有GUS表达,而在真叶、茎、果荚中没有表达。GUS基因的表达活性的结果表明在-1176~-805之间可能存在一个抑制根特异表达的顺式作用元件。
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