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目的1.探讨欧前胡素对肥大细胞介导的体外和体内过敏反应的影响。2.探讨欧前胡素对体内外哮喘模型气道炎症及气道重塑的影响及其作用机制。3.探讨欧前胡素对体内外哮喘模型的抗氧化作用及其相关机制。方法1.建立被动皮肤过敏反应(PCA)小鼠模型,并进行组织学检查;通过体外实验观察欧前胡素在肥大细胞的脱颗粒,组胺释放及钙内流水平;采用ELISA和Western blotting方法检测相应细胞因子和信号通路蛋白水平。2.建立哮喘小鼠模型,使用HE、PAS、Masson染色法检查小鼠肺组织病理学变化;Diff-Quick染色对小鼠BALF中的总细胞和嗜酸性粒细胞(eosinophilia,EO S)进行计数;ELISA方法检测IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量;通过吸入乙酰胆碱来检测气道高反应性;免疫组织化学法检测肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;Western blot对肺组织中α-SMA,MMP-9和肺组织及气道平滑肌细胞(ASMCs)中STAT3及NF-κB信号通路关键蛋白的含量进行定量分析。3.双氢罗丹明(DHR)-123法检测哮喘小鼠模型BALF中活性氧(ROS)的含量;检测肺组织中蛋白羰基含量及丙二醛(MDA)表达水平;抗氧化酶试剂盒检测BALF中超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化能力(TAOC)量;免疫组织化学法和Western blotting法检测肺组织及人支气管上皮(16HBE)细胞中MAPK/Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白的表达水平。结果1.欧前胡素明显降低PCA模型中伊文思兰外渗量和耳肿胀厚度;欧前胡素还可减轻肥大细胞脱粒,组胺释放及钙内流水平;此外,欧前胡素显著减少肥大细胞中TNF-α,IL-1β,IL-4,IL-8,IL-13的含量;欧前胡素明显抑制FcεRI介导的信号通路以及下游NF-κB信号通路关键蛋白的表达水平。2.欧前胡素减少炎症细胞浸润,杯状细胞增生及胶原沉积;欧前胡素减少B ALF中总细胞数和EOS数,IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量,并减轻气道高反应性;欧前胡素明显减少肺组织中α-SMA,MMP-9,p-STAT3及NF-κB p65的阳性面积;欧前胡素明显减少α-SMA、MMP-9,STAT3及NF-κB信号通路的关键蛋白表达量。3.欧前胡素能够减少ROS、蛋白羰基、MDA的量并增加SOD、GSH、TAO C的量;欧前胡素明显减少肺组织中MAPK/Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白的阳性面积;欧前胡素明显减少肺组织及16HBE细胞中MAPK/Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白的蛋白表达量。结论1.欧前胡素的抗过敏作用可能部分是通过抑制FcεRI介导的信号通路以及下游NF-κB信号通路,进而抑制肥大细胞脱颗粒、释放组胺、钙内流,并降低TNF-α,IL-1β,IL-4,IL-8,IL-13等炎症因子的水平而实现的。2.欧前胡素通过STAT3和NF-κB信号通路来减轻体内外哮喘模型气道炎症及气道重塑。3.欧前胡素通过MAPK/Nrf2/HO-1信号通路来维持氧化/抗氧化系统的平衡,从而起到改善哮喘的作用。