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目的:通过复制异烟肼和利福平合用(INH/RFP)肝损伤HepG2细胞模型和小鼠模型,比较慈姑各提取物和慈姑多糖的保肝作用强弱,并探究其肝保护的机制,以期为慈姑的开发及利用提供科学的实验依据。方法:1建立INH/RFP肝损伤HepG2细胞模型,将细胞随机分成9组,分别为空白对照组、正常对照组、INH/RFP模型组、阳性对照(维生素E)组和慈姑各提取物组(即慈姑总提取物组、慈姑正丁醇提取物组、慈姑乙酸乙酯提取物组、慈姑石油醚提取物组和慈姑水提取物组),每组设置6个平行孔,通过检测细胞活性及细胞培养基中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的活性来比较慈姑各提取物的肝保护效果。2建立INH/RFP肝损伤小鼠模型,将90只小鼠按随机数字表法随机分成9组,分别为正常对照组,INH/RFP模型组,慈姑水提取物低、中、高剂量组,慈姑多糖低、中、高剂量组,阳性对照(水飞蓟素)组,每组10只。连续灌胃30d后,通过小鼠一般情况,肝指数,生化指标ALT、AST、LDH、MDA、谷胱甘肽(GSH)活性的检测以及肝组织病理学观察,比较慈姑水提取物和慈姑多糖(SSP)的保肝作用强弱。3基于Nrf2-ARE信号通路,通过RT-PCR方法和Western blot方法检测肝组织的Nrf2和Keap1基因相对表达量和蛋白表达情况,研究慈姑多糖的保肝机制。结果:1细胞活性结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组的细胞存活率明显降低,具有显著性差异(P<0.01);与INH/RFP模型组相比,经慈姑石油醚提取物、慈姑正丁醇提取物、慈姑乙酸乙酯提取物、慈姑水提取物、慈姑总提取物及维生素E的预给药后,细胞存活率由 56.0%分别增加到 61.4%、57.9%、63.8%、86.4%、83.3%和 87.7%。除了慈姑正丁醇提取物组外,其它组均具有显著性差异(P<0.01),尤其慈姑水提取物组存活率较高,与维生素E组相近。细胞培养基ALT、AST、LDH、MDA的活性结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组细胞培养基中的ALT、AST、LDH、MDA水平均明显升高,具有显著性差异(P<0.01);与INH/RFP模型组相比,经过慈姑各提取物及维生素E预给药后,细胞培养基中的ALT、AST、LDH、MDA水平均有所下降,其中慈姑石油醚提取物组、慈姑总提取物组、慈姑水提取物组和维生素E组的四个指标均有统计学差异(P<0.05),尤其是慈姑水提取物组四个指标下降较为明显,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。2各组小鼠一般情况可见:从小鼠身体强壮情况、体重增加情况、皮毛光泽度、反应灵敏度等方面观察发现,与正常对照组相比,INH/RFP模型组小鼠不够强壮,进食少,皮毛暗淡无光泽,脾气暴躁,有个别小鼠出现黄染现象,;与INH/RFP模型组相比,不同剂量的慈姑水提取物组、不同剂量的慈姑多糖组以及水飞蓟素组小鼠以上症状均有不同程度的改善,且相同剂量的慈姑多糖组较慈姑水提取物组改善更明显。小鼠肝指数结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组的肝指数增加,具有显著性差异(P<0.01),;与INH/RFP模型组相比,不同剂量的慈姑水提取物组、不同剂量的慈姑多糖组和水飞蓟素组的肝指数均有降低,具有统计学差异(P<0.05),其中慈姑水提取物高剂量组、慈姑多糖中、高剂量组具有显著性差异(P<0.01)。小鼠血清ALT、AST、LDH活性结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组ALT、AST、LDH活性均有所增加,具有显著性差异(P<0.01);与INH/RFP模型组相比,慈姑水提取物中、高剂量组,慈姑多糖中、高剂量组和水飞蓟素组ALT、AST、LDH活性均有降低,具有统计学差异(P<0.05),尤其是慈姑水提取物高剂量组、慈姑多糖高剂量组和水飞蓟素组具有显著性差异(P<0.01)。小鼠肝匀浆MDA、GSH含量结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组MDA含量升高、GSH含量下降,具有显著性差异(P<0.01);与INH/RFP模型组相比,慈姑水提取物高剂量组,慈姑多糖中、高剂量组和水飞蓟素组MDA含量下降、GSH含量升高,具有统计学差异(P<0.05),其中慈姑水提取物高剂量组、慈姑多糖高剂量组和水飞蓟素组具有显著性差异(P<0.01)。小鼠肝组织病理形态学结果显示:与正常对照组相比,INH/RFP模型组小鼠肝脏切片可见明显的病理改变,切片显色不均匀,有肝细胞肿大,胞浆疏松化变性,有炎性积液病灶等病理变化;与INH/RFP模型组相比,慈姑水提取物低、中剂量组整体切片改善不明显,慈姑水提取物高剂量组、慈姑多糖低、中、高各剂量组和水飞蓟素组病理变化明显改善。3小鼠肝组织RT-PCR与Western blot结果显示:通过RT-PCR法检测结果发现,与正常对照组比较,INH/RFP模型组和慈姑多糖组的Nrf2基因相对表达量都有增多,有统计学差异(P<0.05,P<0.01),Keap1基因相对表达量都有减少,有统计学差异(P<0.05,P<0.01);与IINH/RFP模型组比较,慈姑多糖组Nrf2的基因相对表达量增多,有统计学差异(P<0.05),Keap1的基因相对表达量减少,有统计学差异(P<0.05)。通过Western blot法检测结果发现,与正常对照组比较,INH/RFP模型组和慈姑多糖组的Nrf2蛋白表达都有增多,有统计学差异(P<0.05,P<0.01),Keap1蛋白表达都有减少,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);与INH/RFP模型组比较,慈姑多糖组Nrf2蛋白表达增多,具有显著性差异(P<0.05),Keap1蛋白表达减少,有统计学差异(P<0.05)。结论:通过细胞实验,筛选出慈姑各提取物中慈姑水提取物保肝效果较好,通过动物实验发现慈姑多糖的保肝作用比慈姑水提取物更显著,其保肝可能与Nrf2信号通路调节作用有关,通过下调Keap1、上调Nrf2的表达,降低肝细胞的损伤。