油菜转录因子BnWRKY75基因的遗传转化及转化子的抗病性鉴定

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油菜是我国重要的经济作物之一,但是其容易受到众多病原物的侵害。其中核盘菌能够侵染油菜造成油菜茎腐等症状从而引起严重的产量损失。此外,包括烟草花叶病毒(TMV)在内的一些病毒也可侵染油菜而造成损失。WRKY蛋白属于锌指结构蛋白家族。先前的相关报道证实WRKY蛋白在植物防御应答反应中具有重要作用。本实验通过构建油菜BnWRKY75基因的正义和反义表达载体,使用农杆菌介导的方法获得一些油菜BnWRKY75基因正义和反义转化子,并采用PCR及Real-Time PCR的方法鉴定了转化子。比较了油菜各转化子接种核盘菌后病斑的大小及发病进程,用Real-TimePCR的方法检测了各转化子接种核盘菌后BnWRKY75、BnWRKY40及PR1基因的表达量变化。实验结果表明,BnWRKY75基因在油菜防御核盘菌的反应中为负调控因子。将TMV病毒接种于油菜转化子,Real-Time PCR检测结果表明BnWRKY75基因的转化对TMV病毒侵染无显著影响。对获得的油菜BnWRKY75正义、反义转化子接种核盘菌后的β-1,3-葡聚糖酶活性进行了检测,结果显示BnWRKY75反义转化子中p-1,3-葡聚糖酶活性相比对照有所提高。
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