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目的：探讨10%高渗盐水(Hypertonic Saline, HS)是否可降低脑缺血再灌注损伤所致脑水肿血脑屏障(Blood Brain Barrier, BBB)通透性,并进一步探讨10%HS降低BBB通透性是否与调节缺血侧大脑半球脑组织内星形胶质细胞上血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)及调节血管内皮生长因子受体2(Vascular Endothelial Growth Factor Recepter2,VEGFR2)的表达有关。材料与方法：1、实验动物与分组：180只健康成年SD雄性大鼠随机分成3组：假手术组±生理盐水组(简称假手术组,Sham,n=60)、脑缺血±生理盐水组(简称脑缺血组,Ischemia, n=60)和脑缺血+10%HS组(简称10%HS组,10%HS,n=60)。右侧大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)后2h开始缺血再灌注,并以此为治疗干预时间起点。假手术组和脑缺血组用微量注射泵按0.3m1/h的速度经尾静脉匀速注入生理盐水,10%HS组用微量注射泵按0.3ml/h的速度经尾静脉匀速注入10%HS,根据治疗干预持续时间进一步分为6h、12h和24h三个亚组。2、观察指标：①通过干湿比重法检测6h、12h和24h不同组间大鼠缺血侧大脑半球脑组织脑水含量(Brain Water Contain, BWC)(每个亚组6例)；②在再灌注开始时,以2mg/kg的剂量从大鼠尾静脉注射2%伊文思蓝(Evans Blue, EB)(每个亚组6例),采用分光光度计法测定6h、12h和24h不同亚组间大鼠缺血侧大脑半球EB含量,比较不同组间大鼠BBB通透性的差别；③实时荧光定量(Real Time RT-PCR)法检测6h、12h和24h不同亚组间大鼠缺血侧大脑半球脑组织VEGF及VEGFR2mRNA的变化(每个亚组6例)；④免疫印迹(Western blot)法检测6h、12h和24h不同亚组间大鼠缺血侧大脑半球脑组织VEGF及VEGFR2蛋白的变化(每个亚组6例)；⑤荧光双标免疫组织化学法检测24h组大鼠缺血侧大脑半球脑组织VEGF与GFAP(星形胶质细胞定位标记蛋白)共定位表达的情况(每个亚组6例)。3、数据分析和统计学处理：根据不同类型的资料,所有数据采用SPSS13.0统计软件进行相应的统计学处理。服从正态分布的计量资料以(均数±标准差)(x±s)表示；两因素比较采用析因设计的方差分析,单因素组间比较采用one-way ANOVA方差分析,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’sT3分析；p<0.05为差异有统计学意义。结果：1.1.缺血侧大脑半球脑组织BWC：经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球脑组织BWC差异显著,有统计学意义(F=1032.195,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球脑组织BWC增高；但各个治疗时间点缺血侧大脑半球BWC差异不显著,无统计学意义(F=0.026,P=0.975),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=45.54,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球脑组织BWC增加(P<0.01)；同脑缺血组相比,10%HS组BWC降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致脑水肿,10%HS可减轻脑水肿。1.2.缺血侧大脑半球脑组织EB含量：经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球脑组织EB含量差异显著,有统计学意义(F=351.702,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球脑组织EB含量增高；各个治疗时间点缺血侧大脑半球脑组织EB含量差异显著,有统计学意义(F=3.428,P=0.041),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=23.81,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球脑组织EB含量增加(P<0.01)；同脑缺血组相比,10%HS组伊文思含量降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致BBB通透性增加,10%HS可降低BBB通透性。1.3.缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF mRNA及蛋白表达情况：①经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF mRNA的表达差异显著,有统计学意义(F=510.700,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF mRNA表达增高；各个治疗时间点缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF mRNA表达差异显著,有统计学意义(F=48.651,P=0.000),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=31.028,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF mRNA表达增加(P<0.01)；同脑缺血血组相比,10%HS组VEGF mRNA表达降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致VEGF mRNA表达增高,10%HS可降低VEGF mRNA表达。②经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF蛋白的表达差异显著,有统计学意义(F=479.866,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF蛋白表达增高；各个治疗时间点缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF蛋白表达差异显著,有统计学意义(F=24.217,P=0.000),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=54.566,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF蛋白表达增加(P<0.01)；同脑缺血组相比,10%HS组VEGF蛋白表达降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致VEGF蛋白表达增高,10%HS可降低VEGF蛋白表达。1.4.缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2mRNA及蛋白表达情况：①经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2mRNA的表达差异显著,有统计学意义(F=783.790,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2mRNA表达增高；各个治疗时间点缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2mRNA表达差异显著,有统计学意义(F=47.556,P=0.000),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=26.035,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2mRNA表达增加(P<0.01)；同脑缺血组相比,10%HS组VEGFR2mRNA表达降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致VEGFR2mRNA表达增高,10%HS可降低VEGFR2mRNA表达。②经析因方差分析,结果显示治疗因素不同组间大鼠缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2蛋白的表达差异显著,有统计学意义(F=831.850,P=0.000),与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2蛋白表达增高；各个治疗时间点缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2蛋白表达差异显著,有统计学意义(F=31.734,P=0.000),治疗时间与治疗因素之间有交互作用(F=76.745,P=0.000)。进一步分析治疗因素单独效应：分别在不同治疗时间点,方差齐时组间多重比较采用LSD分析,方差不齐时组间多重比较采用Dunnett’s T3分析进行组间多重比较,同假手术组相比,脑缺血组,10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGFR2蛋白表达增加(P<0.01)；同脑缺血组相比,10%HS组VEGFR2蛋白表达降低(P<0.01)。这表明缺血缺氧可导致VEGFR2蛋白表达增高,10%HS可降低VEGFR2蛋白表达。1.5.缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF与星形胶质细胞共定位表达情况：在治疗24h,荧光双标免疫组织化学法检测发现,与假手术组相比,脑缺血组和10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF在星形胶质细胞上的表达出现增高。与脑缺血组相比,10%HS组缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织VEGF在星形胶质细胞上的表达明显降低。这说明VEGF与星形胶质细胞存在共定位,且10%HS可以抑制脑缺血再灌注损伤所致星形胶质细胞上VEGF的表达上升。全文结论：1.MCAO模型所致SD大鼠脑缺血再灌注损伤可激活缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织星形胶质细胞上VEGF的表达,并可激活VEGFR2的表达,增加BBB通透性,使BWC增高,从而导致脑水肿；2.10%HS可能通过抑制缺血侧大脑半球梗死灶周围脑组织星形胶质细胞上VEGF的表达及抑制VEGFR2的表达而降低缺血性脑水肿BBB高通透性,从而减少BWC,减轻脑水肿。