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脱落酸(ABA)是一种传统的植物激素,内源有活性的ABA不仅是细胞信号而且还是逆境应答信号。内源ABA含量的水平是由ABA的合成速率和其分解速率共同决定的。OsABA8ox1、OsABA8ox2和OsABA8ox3是编码ABA8’羟化酶的三个基因。ABA8′-羟化酶催化羟基化被称为ABA分解代谢过程中的关键步骤。到目前为止,对于ABA分解代谢过程中如何调节气孔运动以维持植物水分平衡的相关证据还是相对匮乏的。本研究通过荧光定量PCR(Realtime q-PCR)等方法对转OsABA8ox2基因水稻进行深入研究,鉴定转基因阳性株系,并对转基因水稻中ABA相关基因的表达水平和表型进行观察并统计,为明确OsABA8ox2基因在ABA代谢途径中的作用提供理论依据,同时也旨在探讨 OsABA8ox2基因对水稻保水能力的影响。 主要研究结果如下: 1.经PCR检测,鉴定出转OsABA8ox2基因水稻阳性株系。荧光定量 PCR检测结果表明,转OsABA8ox2基因水稻中OsABA8ox2基因的表达上升,而 ABA/GA代谢途径的基因OsZEP、SDR等的表达量上升,内源ABA含量则下降。 2.荧光定量PCR检测结果表明,在水稻中,OsABA8ox2基因在根、茎、叶中都有表达。其中,在叶片中的表达量最高,其次是在抽穗后未开花的穗中,在孕穗期的穗中的表达量是最低的。 3.玉米原生质体的瞬时表达实验表明OsABA8ox2蛋白定位在内质网(ER)中,与OsABA8ox1蛋白的定位情况一致。 4.转OsABA8ox2基因水稻的表型发生明显变化,包括种子萌发延迟,萌发率低,结实率降低,同时表现出高度缺水的状态,呈现出萎蔫的表型甚至难以存活,但在高湿度的环境条件下却可以较好的生存。 5.通过对转基因水稻叶片和野生型水稻叶片的扫描电子显微镜观察(SEM)以及生理指标的测定,OsABA8ox2基因可以促进气孔的过度开放,与此同时其可以增加气孔的导度和加快蒸腾速率的现象也逐渐被揭示。