甘草酸二铵对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达PGE2及MMP-1的影响

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目的:体外建立人牙周膜成纤维细胞模型,研究甘草酸二铵对人牙周膜成纤维细胞炎症损伤后的调控作用,为临床牙周病的治疗提供新的实验资料及理论依据。方法:①运用原代组织块法对人牙周膜成纤维细胞进行分离、培养,观察人牙周膜成纤维细胞的生物学特性,采用免疫组织化学方法对细胞进行抗角蛋白及抗波形丝蛋白抗体检测,对其来源进行鉴定;建立稳定的人牙周膜成纤维细胞体外模型。②选取成功培养的4-8代细胞,爬片后,以不同浓度的LPS分别对人牙周膜成纤维细胞进行干预,观察24h后人牙周膜成纤维细胞的形态学变化,并运用免疫组织化学方法检测PGE2及MMP-1的表达变化情况,利用医学图像分析系统对结果进行图像分析和数据收集,筛选出LPS的最佳干预浓度,用于后续实验。③利用②中筛选的最佳的LPS浓度干预人牙周膜成纤维细胞,同时用不同浓度的甘草酸二铵(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)干预人牙周膜成纤维细胞,观察24h后人牙周膜成纤维细胞的形态学变化,并运用免疫组织化学方法检测PGE:及MMP-1的表达变化情况,利用医学图像分析系统对结果进行图像分析和数据收集,采用单因素方差分析法,对经甘草酸二铵及LPS干预后的人牙周膜成纤维细胞中PGE2及MMP-1的表达特征进行数据统计。结果:①人牙周膜成纤维细胞运用组织块法进行培养,能够成功建立稳定的人牙周膜成纤维细胞的体外模型,在倒置显微镜下观察细胞呈长梭形或星形,运J月免疫组织化学方法染色显示细胞抗波形丝蛋白抗体阳性,抗角蛋白抗体阴性,源自中胚层的成纤维细胞特性被典型的表现出来;进行传代培养后,4~8代细胞活力非常好,增殖速度很快,形态也很规则。②PGE2及MMP-1在LPS干预后表达结果呈阳性,并随着LPS浓度的增高,PGE2及MMP-1的表达量有上调趋势,差异具有统计学意义,P<0.05,并且在LPS浓度为10μg/ml时,PGE2及MMP-1的表达量最强,所以把10μg/ml的LPS作为最佳干预浓度,用于后续实验。③用不同浓度的甘草酸二铵均能够下调用最佳浓度(10μg/ml)LPS干预的人牙周膜成纤维细胞表达PGE2及MMP-1,并且随甘草酸二铵浓度的增加PGE2及MMP-1的表达量一直呈现逐渐下调趋势,结果显示:差异具有统计学意义,P<0.05。结论:①采用组织块法能够成功建立人牙周膜成纤维细胞体外模型,这种方法操作简便,成功率较高,并且能够较好地反应原组织的生物学特性,4-8代细胞性能稳定适用于实验研究。②PGE2及MMP-1在经LPS干预后人牙周膜成纤维细胞其表达结果表明,PGE:及MMP-1参与了牙周炎的发生和发展,在牙周炎的发展进程中显著上调,所以我们选择这两个因子来观察甘草酸二铵对牙周病的发展进程可能起到的调控作用。③甘草酸二铵对LPS干预人牙周膜成纤维细胞炎症损伤过程中表达PGE:及MMP1有重要的抑制作用,推测甘草酸二铵可能在牙周炎的进程中起着重要的作用,将为临床牙周病的治疗提供新的实验资料。
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