第一部分 羟基自由基新型比色检测法的建立及应用目的:1.设计一种简单而灵敏且可视化检测羟基自由基的法。2.运用比色法检测青蒿素和双氢青蒿素活化过程中自由基的产生。方法:1.格里斯反应和标准曲线的建立。2.检测Fenton反应中产生的羟基自由基。3.检测水光解过程中产生的羟基自由基。4.检测青蒿素类化合物在活化过程中产生的羟基自基。结果:1.540nm处吸光度与亚硝酸盐浓度的关系建立Griess测试的标准曲线。2.该方法可以灵敏地检测Fenton反应中的OH自由基,同时成功地检测到了水光解过程中的OH自由基。此外我们从两种经典抗疟药青蒿素(Art)和双氢青蒿素(DHA)活化过程中检测到了·OH自由基的释放。其检测限低至纳摩尔。结论:在Griess试验的基础上,开发了一种比色法检测羟基自由基的新策略:能够快速灵敏且可视化检测羟基自由基,证明了青蒿素类药物中青蒿素和双氢青蒿素在活化过程中确实产生了自由基。第二部分 新型荧光探针用于万古霉素的分析及成像目的:1.设计一种新型选择性灵敏的探针来检测万古霉素(Van)。2.探究靶标探针在PBS缓冲液,合成尿液,人血清中Van的检测。3.探析靶标探针的体内成像。4.探究靶标探针响应Van的作用机制。方法:1.通过固相合成法(SPPS)制备多肽链,并选择香豆素和荧光素作为双重荧光报告基团,整合到多肽上,同时制备对照分子。2.利用已合成的探针分子在缓冲液,合成尿液,人血清中检测Van,并探究其响应程度、选择性、灵敏度、pH的影响。3.模拟万古霉素的污染环境,培养斑马鱼实验模型,利用靶标探针进行体内成像。4.利用分子对接,分子动力学(MD),定量测量探针和Van之间形成氢键的数量及距离来探究作用机制。利用光化学手段,来探究探针分子的荧光寿命,荧光团之间的能量传输效率。结果:1.通过固相和液相合成得到一条靶标探针和两条对照探针,分别命名为P1、P2、P3。通过核磁和质谱表征确认无误。2.P1探针在缓冲液、合成尿液中检测Van时呈现良好的线性关系,在合成尿液中最低检测线为92.8nM,并在血清中显示出了检测Van的潜力。对Van具有特异性响应,在中性或弱碱性条件下对Van响应出色,在酸性条件下失去检测能力。P2、P3探针不响应Van。3.P1探针可以在斑马鱼体内检测Van,且探针主要分布在鱼的胃肠道中,可以观察到明显的绿色荧光。4.我们发现P1探针响应Van时并非典型的FRET机理,而是由于荧光团堆叠而引起的荧光自猝灭,当Van与D-Ala-D-Ala肽结合后,荧光可能会由于荧光团的分解而开启,通过TEM成像和动态光散射(DLS)测量证明了我们的猜想。结论:1.开发了一种新型荧光探针,用于Van的检测,选择性好,灵敏度高。2.荧光探针在合成尿液中最低检出限为92.8nM。这使其有可能在临床相关范围内应用。3.P1探针成功应用于斑马鱼体内的Van的检测成像。4.我们的检测策略提供了有关结构-响应关系的新信息,这可能有益于比例式荧光探针的设计。