肌卫星细胞是肌肉干细胞,位于基膜和肌纤维之间。为了研究肌卫星细胞,分离和培养肌卫星细胞是一种关键的常用方法。因此本研究首先建立分离和培养肌肉卫星细胞的方法,通过酶消化,从绵羊胎儿骨骼胎肉中分离肌肉卫星细胞。进一步通过PCR检测Pax7和CD34等以验证从胎肉中分离的胎儿肌卫星细胞。并且通过PCR和Southern blot等方法检测SRY基因对分离的肌肉卫星细胞进行了性别鉴定。胎儿星细胞可促进骨骼骨骼肌发育和损伤修复,而MSTN基因则对胎儿发育产生抑制作用。但其详细调节机理并不清楚。本研究通过ZFN定点敲除技术对培养中的绵羊肌卫星细胞进行MSTN基因敲除,以研究其对肌卫星细胞的调节肌理。体外转录获得MSTN基因敲除ZFN mRNA,转染培养中的肌卫星细胞后等获得23个细胞克隆。筛选MSTN基因5-bp缺失单等位基因敲除的细胞克隆后,通过定量PCR和Western blot等分析,发现MSTN’基因敲除提高了CDK2和FST表达,而降低了p21基因表达。而且发现MSTN基因敲除显著(P<0.01)增加了细胞的增殖能力。细胞周期分析表明,MSTN抑制细胞从G期向S期发育。此外：MSTN敲除明显提高了MyoD和MyoG在细胞中的表达水平。这些结果加深了对MSTN相关调节机理的理解,并提示对肌卫星细胞进行MSTN基因敲除,对研究基因敲除肉羊有指导意义。