肾癌是严重危害人类生命和健康的常见肿瘤之一,其中绝大多数为肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC),起源于近曲小管的上皮细胞,为泌尿系统常见的恶性肿瘤,肾细胞癌缺乏特异的早期症状,当患者出现典型的临床症状时往往已处于中晚期,肾癌病例中约有20%～30%的病人在诊断时已经有转移,25%的病人在根治性肾切除或保留肾单位的手术若干年后发生转移。目前肾癌总体5年生存率已达60%,然而已有转移的病人其2年生存期仅10%～20%。临床上虽然采取积极的手术切除和辅助治疗,但疗效不佳,目前对于进展期肾细胞癌尚未有满意的治疗方法,原因是其机制尚未明,因此迫切需要探索其发病机制以寻找新的治疗方法改善患者的预后。 缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)家族在肿瘤生长进展过程中具有较重要的作用,研究表明HIF在肿瘤发生发展过程中是多种基因表达通路以及信号转导通路的一个汇集点,HIF主要参与血管生成、细胞增殖与存活、糖酵解、红细胞生成素的调节。 目前对HIF家族研究主要集中在HIF-1,对于HIF-2尚缺乏深入研究,研究发现HIF-2与肿瘤的发生发展及恶性程度有关,研究表明肾细胞癌主要表达HIF-2,因此通过影响HIF-2的表达可能达到探索以HIF-2为靶点干预肾癌生长的新途径,本研究期以采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)方法干扰HIF-2表达的研究更具有前瞻性研究价值。为此我们选用表达HIF-2的肾癌细胞株786-0,通过构建HIF-2 RNA干扰的真核表达载体并将其转染入肾癌细胞中,观察HIF-2 RNA干扰对肾癌细胞株786-0的影响,对HIF-2与肾细胞癌相互关系进行初步的探讨,为肾癌的基因治疗提供实验依据,同时可能对揭示肾细胞癌的发病机制有重要的意义。 第一部分.HIF-2 RNAi真核表达载体的构建与鉴定