条斑紫菜丝状体白斑病病原真菌的分离及鉴定

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2004年7月份,于江苏省高公岛一紫菜育苗场采集患病的丝状体贝壳。从微生物学角度,对患病紫菜贝壳丝状体的病症和病原菌进行了初步的研究。 采用梯度稀释法,分别涂海水Zobell 2216E培养基、海水M2固体平板和海水高氏培养基,28℃培养,挑选不同形态的菌落进行纯化,共分离到7株细菌、26株真菌和10株放线菌。 将分离到的菌株进行发酵,菌液离心所得的菌块贴于健康贝壳丝状体表面置于海水盐度1.020、温度20℃、光照1500-20001ux、营养盐(0.001%P-H2PO4,0.0003%N-NO3)及光暗周期L:D=12:12光照培养箱中培养,进行致病性测定,经柯赫氏法则验证,确定病原菌为一株真菌GF014。 菌株GF014在海水PDA、海水查氏(Czapek)和海水马丁氏(Martin)培养基上生长良好,说明其可以很好的利用有机碳源、有机和无机氮源;盐度低于20‰时,萌发和生长速率很大;生长的温度范围为10-28℃。 菌株GF014在海水PDA固体平板表面生长速度中等,呈绒毛状,初期菌丝白色,内部灰绿色,背面深灰绿色,无味,无渗出物,菌丝大多数表生,部分内生,气生菌丝发达,有隔,多分枝,菌丝灰绿色,直径3.0μm~7.3μm。分生孢子器黑褐色,球形,直径为40μm~110μm,器壁不突出,顶端有孔口,圆形。分生孢子为单胞,无色,卵形或椭圆形,大小为0.5~1μm×2~2.5μm。 该特征与半知菌亚门(Deuteromycotina),腔孢纲(Coelomycetes),球壳孢目(Sphaeropsidales),球壳孢科(Sphaeropsidaceae),茎点菌属(Phoma)的分类特征相吻合,因此,该菌株应归属于茎点菌属。同时,对该菌的分类特征进一步分析表明,GF014的分生孢子器和孢子的形态和大小与已知该属的各种均有一定的差异,依其分离自条斑紫菜(Porphyra yezoensis),暂定为该属的一个新种:紫菜茎点菌(Phoma porphyrae)。通过ITS rDNA序列分析和同源性检索发现,GF014与与小球腔菌聚为一类,相似性为99.8%,有性世代可能为子囊菌亚门(Ascomycotina),腔菌纲(Loculoascomycetes),格孢腔菌目(Pleosporales),小球腔菌科(Leptosphaeriaceae)。 茎点菌属(Phoma)包括的种类很多,其中很多是引起植物病害的重要病原菌,广泛分布于世界各地,目前还没有从条斑紫菜分离的报道。
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