论文部分内容阅读
猪流感(SwineInfluenza，SI)是由正粘病毒科A型流感病毒(SwineInfluenzaVirus，SIV)引起的猪的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病。为了做好H1N1亚型SI的免疫防制工作，本研究旨在对从广东省发病猪群中分离到的一株猪流感病毒A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)(简称SIVGD株)的毒力、免疫原性及遗传背景进行研究，并对利用该毒株制备的油乳剂灭活疫苗进行免疫效果评估。
结果表明，该毒株HA效价为1∶1024、鸡胚半数感染量(EID50)、组织培养半数感染量(TCID50)分别为10-5.6/0.2mL、10-4.0/0.2mL；试验猪人工感染SIVGD株后，出现临床症状但不死亡，能分离到病毒并能检测到特异性抗体；试验鸡、Balb/c鼠人工感染SIVGD株后，不出现临床症状，但能分离到病毒并能检测到特异性抗体。
对该毒株的基因组测序分析结果表明：SIVGD株的HA基因cDNA片段长度为1778bp，其开放阅读框(ORF)为1701bp，编码由566个氨基酸残基组成的HA蛋白；NA基因cDNA片段长度为1458bp，ORF为1410bp，编码由469个氨基酸残基组成的NA蛋白；NP基因cDNA片段长度为1565bp，ORF为1515bp，编码由504个氨基酸残基组成的NP蛋白；M基因cDNA片段长度为1027bp，其中M1、M2的ORF分别为759bp、294bp，分别编码由252个氨基酸残基组成的M1蛋白、由97个氨基酸残基组成的M2蛋白；NS基因cDNA片段长度为890bp，其中NS1、NS2的ORF分别为660bp、366bp，分别编码由219个氨基酸残基组成的NS1蛋白、由121个氨基酸残基组成的NS2蛋白；PA基因cDNA片段长度为2233bp，ORF为2151bp，编码由716个氨基酸残基组成的PA蛋白；PB1基因cDNA片段长度为2341bp，ORF为2280bp，编码由759个氨基酸残基组成的PB1蛋白；PB2基因cDNA片段长度为2341bp，ORF为2280bp，编码由759个氨基酸残基组成的PB2蛋白。其中HA蛋白切割位点氨基酸组成为：IPSIQSR↓G，符合低致病力流感病毒分子特征。从遗传进化关系研究结果看，SIVGD株属于经典型H1N1亚型SIV毒株。
将SIVGD株用SPF鸡胚扩增后，收获HA效价≥1∶512的尿囊液做为工作毒，经1％二乙烯亚胺(BEI)完全灭活后，按常规方法制成H1N1亚型SIV单价油乳剂灭活苗，对该疫苗进行评估的结果表明：其对靶动物(猪)和试验动物(小鼠)的安全性达到兽用生物制品要求；按推荐免疫剂量(2mL/头)免疫28日龄试验猪后第4周HI抗体滴度达到1∶557，至免疫后28周，其HI滴度仍保持在1∶160以上，能抵御同亚型猪流感病毒的攻击；其在首免后2周，进行加强免疫，则二免后第2周，HI抗体滴度达到1∶1315，至免疫后30周，其HI滴度仍保持在1∶160以上。该疫苗在4℃～8℃冷藏保存6、12个月，性状无改变，免疫效果不改变。同时，为方便该疫苗今后的规模化生产，本研究还初步建立了疫苗质量评估的小鼠模型。