流感的流行给人类健康带来很大的危害,这就迫切要求开发出具有广谱防护效果的流感疫苗。流感病毒包膜蛋白M2因其高度保守性而成为疫苗研制的重要靶蛋白。在本论文中,我们重点研究了流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)的免疫防护能力和防护机制,并取得了以下创新性研究成果。我们发现流感M2e具有很强的免疫原性,合成的M2e多肽无需载体蛋白就能诱导产生高滴度的特异性抗体,并且在攻毒实验中能保护小鼠免于致死剂量流感病毒的攻击。此外,研究发现M2e多肽能诱导产生特异性的T细胞反应,从而证明了在流感病毒M2e上存在Th细胞表位。这些研究成果部分阐明了流感病毒M2蛋白的免疫防护机制。研究发现利用定点突变的方法将M2e多肽上的半胱氨酸残基替换成丝氨酸后不会影响M2e多肽的抗原性,但会显著降低其免疫原性,丧失诱导产生特异性免疫应答的能力。此外,我们还发现M2e多肽可以通过半胱氨酸残基形成的链间二硫键交联形成多聚体。这表明M2e的半胱氨酸残基对维持其免疫原性起到关键作用。为了探讨M2蛋白诱导的免疫应答与病毒防护效果之间的关系,我们利用添加CpG-ODN佐剂的方法来影响M2e多肽诱导产生的免疫应答。研究发现在M2e多肽中加入CpG-ODN能显著提高其诱导产生的抗体水平和T细胞反应,并且促进免疫反应向Th1型发展。但是免疫应答的增强反而降低了高剂量病毒攻击时的防护效果。我们将M2e多肽与传统的裂解疫苗联合免疫,以增强裂解疫苗对不同亚型毒株的交叉防护能力。研究发现M2e多肽与裂解疫苗的联合免疫不会影响血凝抑制抗体的产生,但是佐剂的使用对联合免疫诱导的M2e特异性免疫应答有重要影响。在铝佐剂中,联合免疫能诱导产生M2e特异性的免疫应答,而在MF59佐剂中却无此效果。此外,疫苗诱导的交叉防护效果也受所用佐剂的影响。在铝佐剂中,加入M2e多肽能提高裂解疫苗的交叉防护效果,而在MF59佐剂中反而降低其交叉防护能力。这些研究结果提示M2实验疫苗的防护效果也与佐剂的配伍相关。