论文部分内容阅读
第一部分Wiskott-Aldrich综合征基因、蛋白与临床研究目的：建立中国最大的Wiskott-Aldrich综合征(WAS)患儿数据库,探讨基因型与临床表型及远期预后的关系。方法：2011年2月～2012年9月,收集21例WAS患儿外周静脉血,流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMCs)中WAS蛋白(WASp)表达,并对WASp基因直接双向测序分析突变情况。随访2000年4月～2012年9月确诊的81例WAS患儿临床资料,分析基因型与临床表型及远期预后的关系。结果：81例男性患儿,9例为X连锁血小板减少症(XLT),临床表型评2分；56例为典型WAS,评3/4分；12例发生自身免疫性疾病及1例发生恶性肿瘤,评5分；3例评分不详。FCM检测64例患儿PBMCs中WASp表达,40例不表达,18例单峰部分表达,6例双峰部分表达。78例患儿WASp基因测序共发现60种不同突变,包括20种新发突变及8种热点突变。其中,错义突变17例,无义突变17例,插入突变5例,缺失突变16例,拼接位点突变19例,及复合突变4例。XLT患儿8例为错义突变,1例基因突变未明确；5例WASp单峰减少表达,2例不表达,2例未检测。典型WAS患儿包括31例无义/插入/缺失突变,15例拼接位点突变,6例错义突变,2例复合突变,2例基因突变未明确；32例WASp不表达,10例单峰减少表达,2例双峰减少表达,12例未检测。评5分患儿有4例无义突变(包括2例回复突变),4例拼接位点突变,3例错义突变,1例缺失突变,1例复合突变；6例WASp不表达,4例双峰减少表达,3例单峰减少表达。未接受造血干细胞移植的57例患儿,远期生存率典型WAS组低于XLT组(P=0.18),非错义突变组低于错义突变组(P=0.26,0.55),WASp阴性组低于WASp阳性(单峰/双峰)组(P=0.08,0.20)。结论：WASp基因突变将不同程度影响患儿临床表型及远期预后。错义突变及可产生正常拼接产物的拼接位点突变患儿可有部分WASp表达,临床表型较轻,远期预后较好;WASp不表达的典型WAS患儿则需及早接受免疫重建治疗。第二部分WASp基因突变对细胞免疫功能的影响目的：检测Wiskott-Aldrich综合征(WAS)患儿Th1、Th2、Th17及Treg细胞数量,探讨WASp基因突变对CD4+T细胞免疫功能的影响。方法：2011年3月～2012年7月,收集14例WAS患儿、23例同龄健康儿童及14例健康成人外周血,流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th1、Th2、Th17及Treg细胞分别占CD4+T细胞比例,分析CD4+T细胞亚群变化,探讨WASp基因突变对CD4+T细胞免疫功能的影响。结果：14例WAS患儿与23例同龄健康儿童平均年龄分别为1.97岁及1.89/2.41岁(P=0.912/0.677),14例健康成人平均年龄为30.79岁。FCM检测PBMCs中CD4+T细胞各亚群数量,WAS患儿Th1/CD4+T细胞为18.28±11.08,与同龄健康儿童15.89±6.34相当(P=0.478),而显著低于健康成人31.86±11.67(P=-0.004)；患儿Th2/CD4+T细胞为1.20±1.02,与同龄健康儿童0.78±0.46及健康成人0.68±0.58相当(P=0.177,0.112);患儿Th17/CD4+T细胞为1.47±0.76,与同龄健康儿童0.99±0.51及健康成人1.96±0.85相当(P=-0.058,0.123)；患儿Treg/CD4+T细胞为2.88±1.19,显著低于同龄健康儿童4.80±1.37(P=0.003),而与健康成人3.55±0.68相当(P=0.081)。结论:WAS患儿1型T辅助/效应细胞(Th1)显著低于健康成人可能与年龄因素相关,而调节性T细胞(Treg)显著低于同龄健康儿童则提示Treg产生及功能缺陷可能是WAS患儿易发生自身免疫性疾病的关键因素,其作用机制有待进一步研究。