论文部分内容阅读
链霉菌作为一种典型的土壤细菌,在生长和生理代谢中常常需要面对不同的生长环境和生存压力,长期的进化过程形成了一套完整的形态分化和代谢机制,天蓝色链霉菌能够产生十一烷基灵菌红素(Red)、放线菌紫素(Act)、次甲霉素(Mmy)和CDA(lipopeptide calcium-dependent antibiotic)四种抗生素,是研究链霉菌形态分化和次级代谢过程调控的模式菌。天蓝色链霉菌stgR是LTTR (LysR-type transcription regulator)家族典型的转录调控因子,研究发现其对基因转录具有负调控作用。本文首先通过PCR-targeting的方法对天蓝色链霉菌进行基因敲除,构建了stgR缺失株,采用PCR和Southern blot进行了验证,同时构建了stgR的高拷贝株以及回补株；stgR缺失株在营养充分的培养基上(MS,R5),气生菌丝和孢子的生长大大提前；基础培养基(SMM)和营养培养基(YEME)上缺失株的抗生素产生时间提前,产量也有一定程度增加。转录水平分析表明,影响这些变化的关键性基因chpE、actⅡ-orf4和redD的转录都得到了不同程度增强。基于文献报道,LTTR家族因子对于自身基因表达往往具有反馈调控作用,因此我们构建带有stgR启动子(stgRp)的pIJ8630-stgRp启动子探测质粒,分别导入到野生型和缺失株中,通过Westren blotting实验,发现stgRp活性在野生型中要明显低于缺失株,表明StgR对于自身启动子存在负调控作用,即stgR基因在发育过程中的表达水平受到自身蛋白的抑制。