茶树中酯型儿茶素与非酯型儿茶素的区别仅在于C环3位上有无没食子基团。本课题组前期研究表明,催化非酯型儿茶素没食子酰基化的酶是一种酰基转移酶,且该酶可能属于丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)家族。为挖掘可能参与没食子酰基转移功能的基因,本文首先利用生物信息学手段,对茶树转录组及基因组数据库中的SCPL进行筛选、基序和进化树分析及功能预测。其次,利用RACE技术,克隆了茶树CsSCPL3基因全长,并利用荧光定量实时PCR、原核表达、酵母真核表达及农杆菌介导的烟草异源植物表达等技术,对该基因的组织特异性表达和功能进行预测。本论文研究旨在为茶树SCPL蛋白功能鉴定奠定基础。主要研究结果如下:　　1.参考拟南芥的分类方法,对来自茶树转录组及基因组测序数据库中49条CsSCPLs蛋白序列的基序和进化关系进行了分析和分类,结果表明,49条茶树CsSCPLs可分3类,其中9条和8条分别属于CladeIA和CladeIB类蛋白;17条和15条分别属于CladeⅡ和CladeⅢ类蛋白。与酰基转移相关的蛋白属于CladeIA类。　　2.采用RT-PCR技术,克隆了茶树CladeIA类中的CsSCPL3基因的全长序列。CsSCPL3的全长为1686bp,开放阅读框长度为1413bp,预测其分子量54.7KD,等电点5.81。　　3.对CsSCPL3蛋白进行了生物信息学分析,结果表明CsSCPL3具有SC族羧肽酶中S10家族特有的高度保守的“α/β水解酶折叠”结构;该蛋白包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点、及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征;预测CsSCPL3蛋白可能为分泌蛋白;该蛋白还可能存在4种修饰方式,即N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、以及N-端豆蔻酰化位点。　　4.实时荧光定量PCR结果显示,CsSCPL3在芽、叶、茎和根中都有表达,其中在叶中的相对表达量明显高于茎和根;在幼嫩的芽中表达量明显高于成熟叶。　　5.构建了pET32a-CsSCPL3重组质粒进行原核表达,并研究了不同诱导温度、不同诱导时间等条件对重组蛋白表达的影响。结果表明,CsSCPL3基因的最佳诱导条件为37℃诱导4h;目标蛋白条带的分子量为70KD,与预测大小相符,表达蛋白以包涵体形式存在。　　6.构建了pYES-dest52-CsSCPL3重组质粒进行真核表达,成功实现了CsSCPL3基因在酿酒酵母中的表达,但未检测到酶活性。　　7.构建了pCB2004-CsSCPL3重组质粒,利用农杆菌EHA105侵染烟草,获得了转基因烟草。转基因烟草中的CsSCPL3功能有待进一步验证。