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目的:乳腺癌作为女性最常见恶性肿瘤,其发病率在女性恶性肿瘤中居第一位。传统的肿瘤标志物诊断效能较低,无法满足辅助临床诊断的需求,且病理诊断作为乳腺癌诊断金标准,具有创伤性以及诊断周期长等缺点,因而需找到一种新型乳腺癌诊断的非侵入性标志物。本文旨在探讨miR-370-3p在乳腺癌中的生物学作用及分子机制;检测乳腺癌病人和健康人群组织、血清及其外泌体(exosome)中miR-370-3p表达水平,并结合临床资料进行分析,探讨其作为乳腺癌诊断标志物的可行性及临床应用价值。方法:(1)定量PCR检测miR-370-3p在乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞内表达水平。(2)采用 nc-mimics(MNC),miR-370-3p mimics(370-mimics)、nc-inhibitor(INC)和miR-370-3p inhibitor(370-inhibitor)转染乳腺癌细胞,定量 PCR测定转染之后乳腺癌细胞miR-370-3p的表达水平。体外采用细胞克隆形成以及transwell迁移实验观察miR-370-3p对细胞增殖和迁移的作用,Western blot测定转染细胞中PCNA及EMT相关蛋白表达水平。(3)体内构建裸鼠皮下成瘤模型,观察miR-370-3p对裸鼠乳腺肿块体积及重量影响。(4)采用TargetScan和PicTar等生物信息软件预测靶基因;定量PCR筛选候选靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因;Western blot测定靶基因以及相关信号通路蛋白的表达。结合临床相关病理资料,分析靶基因的临床意义。(5)采用试剂盒提取血清外泌体,透射电镜对外泌体形态进行拍摄及鉴定。定量PCR检测乳腺癌组织,血清以及血清外泌体中miR-370-3p表达量。绘制相应ROC曲线并分析诊断效能。结合临床病理资料评价miR-370-3p在乳腺癌诊断中的价值及临床意义。结果:(1)乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231中miR-370-3p表达水平较乳腺上皮细胞MCF-10A显著增加。(2)与转染MNC相比,转染370-mimics后的MCF-7,MDA-MB-231细胞迁移及克隆数显著增加;与转染INC相比,转染370-inhibitor后的MCF-7,MDA-MB-231细胞迁移克隆数显著减少。转染370-mimics后的MCF-7,MDA-MB-231中E-cadherin蛋白的表达量明显降低,N-cadherin,Vimentin,PCNA蛋白的表达量明显增加;相反,转染370-inhibitor后的MCF-7,MDA-MB-231中E-cadherin蛋白的表达量显著增加,N-cadherin,Vimentin,PCNA蛋白的表达量显著降低。(3)成功构建裸鼠皮下荷瘤模型。体内实验表明转染370-mimics后的MDA-MB-231 在裸鼠体内形成肿瘤的体积及重量均大于对照组,转染 370-inhibitor 后则相反。(4)FBLN5在乳腺癌组织及乳腺癌细胞中低表达,miR-370-3p靶向负调控FBLN5。miR-370-3p能促进蛋白NF-κB P65的表达,活化NF-κB信号通路。FBLN5与乳腺癌组织直径及TNM分期显著负相关。(5)成功分离提取并鉴定血清外泌体。miR-370-3p在乳腺癌组织,血清及外泌体中表达量显著增加。miR-370-3p具有较好的诊断效能及检测特异性。血清中的miR-370-3p与淋巴结的转移程度,TNM分期成正相关;血清外泌体中miR-370-3p与肿瘤直径大小,淋巴结的转移程度,TNM分期成正相关。结论:(1)miR-370-3p促进乳腺癌细胞的增殖与转移,在乳腺癌的进展中发挥促癌基因的作用。(2)miR-370-3p靶向负调控FBLN5,活化NF-κB信号通路;组织FBLN5可作为乳腺癌诊断的良好指标。(3)血清及血清外泌体来源的miR-370-3p可能是乳腺癌诊断的潜在新型非创伤性分子标志物,具有重要的临床应用价值。