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糖尿病为困扰医学界的难题,开发有效天然无毒副作用药物,是药学工作者努力的目标。1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)存在于桑叶中,具有降低血糖作用。本研究内容为从桑叶中提取1-DNJ粗提物,进一步纯化得到高纯度1-DNJ。对高纯度的1-DNJ进行了动物药效学实验,验证高纯度1-DNJ具有降低血糖作用。用高纯度1-DNJ为原料,加入适宜辅料,采用挤出滚圆法制备载药丸芯和流化床包衣法制备1-DNJ控释微丸。摸索控释微丸制备工艺,考察主要工艺参数。对控释微丸进行质量控制。对优化后的控释微丸检测质量方法学研究和验证。1-DNJ控释微丸在体外不同pH溶出介质的溶出介质中溶出曲线考察,预测口服控释微丸后在人体胃中pH1.2到肠道中逐渐变为pH6.8的不同pH环境中的溶出行为。在动物体内药动学研究,对提取1-DNJ纯化物与1-DNJ控释微丸在体内药动学对比研究,考察1-DNJ在体内控释效果。利用纤维素酶法酶解植物细胞壁,有利于有效成分溶解和溶出。本研究提取1-DNJ通过单因素考察,最终确定各个提取因素的最佳提取范围,在利用Box-Behnken设计中心组合法优化纤维素酶提取的最佳提取工艺条件。以1-DNJ提取收率作为响应面,进行分析各个因素之间的相互作用,通过实验后的响应面法确定最佳提取工艺和条件。由于1-DNJ为糖的类似物结构简单而特殊,并其他化学相似成分并存。因此适合分离纯化的方法较少,目前比较高效的纯化方法为采用离子交换法,因为1-脱氧野尻霉素的化学分子结构中含-NH,在植物中的酸性和中性环境中存在状态为正离子形式,所以本研究使用阳离子交换树脂法从粗提物中吸附1-DNJ,再选择适宜的洗脱溶剂进行洗脱,研究阳离子交换树脂中1-DNJ的吸附特征。将经过阳离子交换树脂中1-DNJ分离纯化后的1-DNJ再上阴离子交换树脂除掉其他无活性成分和其他无效杂质,最后采用超滤膜过滤的方法除去其他大分子物质,如一些大分子糖类和大分子蛋白质类等,从而达到分离和纯化的目的,最终得到高浓度1-DNJ。采用家兔作为实验动物进行了 1-DNJ提取纯化物药效学实验。本实验以麦芽糖和蔗糖做为底物,进行研究1-DNJ对α-葡萄糖苷酶的抑制效果。本研究采用挤出滚圆方法制备1-DNJ控释微丸载药丸芯,载药丸芯外层包隔离层以及控释薄膜衣采用流化床包衣方法。微丸的控释衣膜层能够使1-DNJ以恒定的速度缓慢释放,能够调控1-DNJ控释微丸在胃和小肠中的释放速率,从而使1-DNJ能持续缓慢稳定的发挥其降低血糖的药效作用。此外,在体外还进行了 1-DNJ溶出行为曲线实验,1-DNJ在pH1.2、pH4.5、pH6.8不同pH介质中释放速度均符合设计要求。由于1-DNJ化学分子中无发色基团,无法直接采用高效液相紫外法检测。对桑叶中提取和纯化的1-脱氧野尻霉素进行定性和定量方法进行了研究,建立了使用高效液相色谱荧光器检测法,通过使用芴甲氧酰氯柱前衍生法。1-DNJ控释微丸质量稳定性考察。加速实验:在条件为相对湿度为75±10%,温度为40±3℃,考察6个月。分别在0,1,2,3,6个月取样,考察微丸的性状、含量和溶出曲线。长期实验:条件为相对湿度60±10%,温度25±3℃,的条件下放置24个月,分别于第0,3,6,9,12,1 8,24个月末取样,考察微丸性状、含量和溶出曲线。进行了体内药动学实验研究,选择比格犬作为药动学试验动物,通过对比格犬血药浓度进行处理和研究。其中1-DNJ峰浓度Cmax(μg/L)和达到峰值时间tmax(h)均采用实际检测值。考察口服后最大血药浓度Cmax和血药浓度达到最大的时间Tmax值,对比1-DNJ控释微丸在体内的控释效果。计算生物利用度,考察1-DNJ控释微丸相对生物利用度。1-DNJ提取最佳条件为:提取液温度为56℃;物料液体质量浓度为0.76 kg/L;提取pH值为4.2和纤维素酶质量浓度为3.3 mg/mL。最终优化出最佳的阳离子交换树脂纯化1-DNJ工艺为;氨水浓度为0.5 mol/L,洗脱速度为1mL/min,上柱液浓度为1.5 mg/mL。纯化后1-DNJ百分含量为5.48%,再经过816氯型阴离子交换树脂纯化后1-DNJ的纯度达到了10.24%,最后经超滤处理,1-DNJ纯化高达到19.83%。说明1-脱氧野尻霉素经过一系列的纯化后,1-DNJ纯度得到了明显的提高。药效学实验结果表明1-DNJ对家兔小肠粘膜上的麦芽糖酶和蔗糖酶均有一定程度的抑制作用。1-DNJ纯度越高,其抑制效果也越强。使用挤出-滚圆法挤出转速300 r/min,滚圆转速900 r/min,滚圆时间10 min。流化床包衣工艺粘合剂聚维酮K30用量6%,致孔剂聚乙二醇6000用量25%,控释包衣材料羟丙基甲基纳米纤维素邻苯二甲酸酯包衣增重12%。制备微丸效率高,微丸的粒度分布均匀,表面光滑,圆整度好,辅料用量少,且载药量高,是一种比较先进的制备微丸方法。高效液相法检测1-DNJ含量经过线性、定量限、精密度、准确度、耐用性方法学验证,该方法检测准确度高。1-DNJ控释微丸经过加速和长期稳定性考察试验,微丸外观无变化,为白色微丸。微丸中1-DNJ含量和溶出曲线经过加速6个月和长期24个月后与0时相比没有发生变化。这说明微丸的稳定性良好,适合长期保存。药动学实验结果表明,1-DNJ控释微丸与未包衣微丸相比达到峰值时间tmax(h)显著延迟,达到了缓控释目的和效果。1-DNJ控释微丸具有比桑叶提取纯化物更好的缓释特性。1-DNJ控释微丸体内吸收和体外释放呈现良好的相关性。Tmax延迟有助于维持血浆浓度,增加1-DNJ的相对生物利用度,具有非常重要临床应用价值。