论文部分内容阅读
对鲜人参不同部位（芦头、主根、须根）、不同组织（横切面观,皮部、韧皮部、木质部）中水溶性蛋白进行比较研究,找出蛋白质分布及含量的差异。建立人参水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）指纹图谱和人参水提物高效凝胶过滤色谱（HPGFC）指纹图谱。揭示人参加工炮制机理提供依据,为人参质量控制体系提供必要补充。本实验购于吉林省8个地方,4年与5年生的鲜人参（Panax ginseng C.A.Mey）,共16批次样品。采用Tris·HC1（含0.15MNaCl,pH 7.4）缓冲液,抽提鲜人参不同部位、不同组织的总蛋白,不同年生主根16批次水提物。运用凝胶电泳、紫外分光光度法、高效凝胶过滤等现代生物技术进行人参蛋白比较研究,进行人参主根水溶性蛋白SDS-PAGE指纹图谱、人参主根水提物HPGFC指纹图谱的研究。利用Bradford蛋白试剂定量盒,在592nm下测定人参总蛋白含量。SDS-PAGE法采用双垂直电泳槽,浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度为15%,浓缩胶电压为70mV,分离胶电压140mV。HPGFC法采用凝胶排阻色谱柱（OHpak SB-803 HQ,8mm×300mm）:排阻极限100kDa,流动相:10 mmol·L-1Tris·HCl(含10 mmol·L-1 NaCl,pH 7.4),流速:1.0 ml·min-1,柱温:25℃,检测波长:280nm。各占人参不同部位2%左右的总蛋白,由电泳胶片可知人参各部位都存在8个主要蛋白亚基,65kDa、25kDa、18kDa、16kDa蛋白亚基有较大含量差异;芦头、主根、须根中,都主要以分子量65kDa聚集蛋白存在,均占总蛋白80%以上。各占人参不同组织1%以上的总蛋白,由电泳胶片可知人参各组织（横）中都存在8个主要蛋白亚基,65kDa、8kDa蛋白亚基有较大含量差异。韧皮部、木质部中主要以分子量65kDa天然聚集蛋白状态存在,占总蛋白80%以上;皮部中分子量100kDa以上和25kDa天然聚集蛋白约占总蛋白70%,65kDa天然蛋白约占30%。人参水溶性蛋白SDS-PAGE.指纹图谱中,考察凝胶电泳方法准确度、精密度、重复性的RSD值均小于3%,测定范围为2.5mg·ml-1～5mg·ml-1,相似度都在0.85以上。人参水提物HPGFC指纹图谱中,考察高效凝胶色谱方法准确度、精密度、重复性的RSD值均小于3%,测定范围为10mg·ml-1～16mg·ml-1,相似度都在0.87以上。人参中分子量100kDa以下蛋白质分布不同,含量不同;人参水溶性蛋白SDS-PAGE指纹图谱、人参水提物HPGFC指纹图谱方法具有快速、准确、灵敏度高等特点,可作为质量控制的鉴别手段,为名贵药材人参的开发和利用奠定了基础。