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研究目的:SPARCL1与卵巢癌或肿瘤耐药相关的研究薄弱,而与卵巢癌耐药调控相关的报道更是罕见。基于生物信息学手段挖掘SPARCL1对于肿瘤进展及卵巢癌耐药的调控,并通过体外实验验证SPARCL1对卵巢癌SKOV3/DDP细胞生物学功能的影响,进而筛选参与调控SPARCL1表达的miRNA,分析其在卵巢癌耐药中的表达变化及其调控机制。研究方法:通过Coremine medical和GeneMANIA进行生物学过程/通路注释、基因-蛋白互作等生物信息学方法;通过Oncomine及TCGA等数据库提取基因表达信息及相关临床数据。利用慢病毒载体构建过表达SPARCL1的SKOV3/DDP细胞,利用RT-qPCR和Western blot检测SPARCL1表达水平,CCK8法检测IC50和生长曲线,平板克隆和划痕实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。用生物信息学技术如TargetScan、microRNA.org及microT-CDS数据库预测靶点SPARCL1的miRNA,并对筛选miRNA进行验证。研究结果:1.生物信息学分析结果:SPARCL1作为潜在抑癌基因,在包括卵巢癌在内的多数肿瘤中下调表达。SPARCL1与肿瘤进展、诊断及预后显著相关,并与至少9种肿瘤病人的不良生存显著相关。SPARCL1表达差异与卵巢癌的组织学分级具有相关性,SPARCL1与6个基因(TNF、FOS、ABCB1、STAT3、WWOX、PMS2)存在直接互作,且通过多种方式参与卵巢癌耐药调控,如细胞增殖、细胞周期、细胞迁移、凋亡过程和血管生成等。2.体外实验验证结果:在SKOV3/DDP中稳定转染SPARCL1过表达病毒,过表达SPARCL1后,SKOV3/DDP对顺铂的IC50明显下降。SKOV3/DDP细胞组从48h开始SKOV3/DDP-OE与SKOV3/DDP及SKOV3/DDP-EV组比较生长速度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在7.5μM顺铂加药处理条件下,SPARCL1过表达的SKOV3/DDP细胞的克隆形成能力明显降低(P<0.05)。SPARCL1过表达的SKOV3/DDP细胞的划痕愈合能力也显著降低。流式细胞仪检测发现,SPARCL1基因过表达可阻滞SKOV3/DDP细胞周期于G0/G1期,但细胞凋亡实验无明显差异。3.调控SPARCL1的microRNA筛选及验证结果:在预测软件的基础上,筛选出3个能够潜在调控SPARCL1表达的microRNAs,通过双荧光素酶报告进一步确认miR-448可以抑制SPARCL1基因的表达。结论:1.SPARCL1作为潜在抑癌基因,在卵巢癌中下调表达,通过细胞增殖、细胞周期、血管形成等生物学方式影响卵巢癌耐药发生,并与6个基因直接互作影响卵巢癌耐药进展。2.SPARCL1能够提高耐药细胞对顺铂的敏感性,并抑制细胞增殖和细胞迁移,阻滞细胞周期。3.miR-448能靶向调节SPARCL1基因,且在预测位点区域中(Position62-68/211-218)发挥抑制作用。