从加纳籽中提取、分离纯化5-羟基色氨酸的工艺研究

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5-羟基色氨酸(5-HTP)具有多种生物学作用,是重要的神经类药物和保健药原料,临床上应用非常广泛,有重要的的利用价值和广阔的市场前景。所以加强5-羟基色氨酸提取、分离纯化以及检测方法方面的研究,具有十分重要的意义。 非洲谷物加纳籽富含5-羟基色氨酸,本文以加纳耔为原料,以5-羟基色氨酸为研究对象,优化了从加纳籽中提取天然物质5-羟基色氨酸的技术,本着使生产5-羟基色氨酸成本更低的目的,进行了5-羟基色氨酸的提取、分离纯化以及检测方法的研究,取得了以下成果: 1、通过对提取方法、提取溶剂的研究,在单因素实验基础上采用四因素三水平正交实验对提取条件进行优选,确定了最佳提取工艺:加纳籽脱脂粉过20目筛;蒸馏水热回流加搅拌动态提取;提取温度80℃;提取次数2次;料液比1:15(m/v):提取时间3h。对原料中5-羟基色氨酸的含量进行了测定,为11.20%。 2、通过对加纳籽水提液澄清除杂、大孔吸附树脂层析、活性炭脱色、结晶、重结晶等分离纯化步骤对5-羟基色氨酸粗品进一步纯化。系统地对上述纯化过程进行了研究,确定了澄清除杂最佳方案,最佳分离纯化工艺条件,优选了结晶条件。结果表明重结晶后5-羟基色氨酸的的得率为6.65%,对加纳籽原料中5-HTP的提取率为59.38%,纯度可达到97.30%。 3、采用薄层色谱法对5-羟基色氨酸定性定量测定,展开剂为正丁醇:冰醋酸:水=3:1:1,显色剂为0.2%茚三酮乙醇溶液,Rf为0.55。以570nm为扫描波长,单波长反射锯齿扫描。每点0.8~1.6μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),RSD为1.69%。 4、运用高效液相色谱对5-羟基色氨酸进行含量测定,采用反相色谱柱Symmetry C18(5μm,4.6×150mm),检测波为276nm,流动相为甲醇:水=5:95(V/V),保留时间在8min左右。5-羟基色氨酸在0.8~4μg范围内,含量与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9991),RSD为0.71%。
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