论文部分内容阅读
本实验对粗茶皂甙进行分离提纯,并且研究测定皂甙含量的最佳方法,再以提取茶皂甙和纯品茶皂甙为试验材料,研究其对甲烷产量和瘤胃发酵的影响;利用荧光定量PCR技术分析检测瘤胃微生态主要菌群的变化,并进一步研究茶皂甙的毒性机理。试验一对粗茶皂甙（CTS）进行了分离提纯,并研究了测定皂甙的最佳方法,经测定粗茶皂甙的皂甙含量为40%,多糖含量为16%,正丁醇提取茶皂甙（BTS）的皂甙含量为70%,非皂甙活性物质（OBC）的多糖含量为80%。试验二以分离得到的茶皂甙和纯品茶皂甙为试验材料,研究其对甲烷产量和瘤胃发酵的影响,并且利用荧光定量PCR技术分析检测瘤胃微生态主要菌群的变化,本部分分为两个试验,试验1添加0,1.71,3.43和8.68 mg/200 mg底物的BTS,添加0.6,1.2和2.4 mg/200 mg底物的OBC,6 mg/200 mg底物的CTS作为正对照,体外培养24小时后,取样测定甲烷产量、瘤胃发酵指标和微生物数量。结果表明:在底物中添加CTS,BTS和OBC对瘤胃pH、产气量和挥发性脂肪酸没有影响。但添加CTS和BTS提高了（P < 0.05）丙酸比例、降低了（P < 0.05）瘤胃氨氮浓度。添加BTS线性和二次降低了（P < 0.05）甲烷产量,相反,添加OBC线性提高了（P < 0.05）甲烷产量。BTS不影响甲烷菌的数量,但是OBC显著增加了（P < 0.05）甲烷菌数量,BTS降低了（P < 0.05）原虫的数量,且随BTS的增加呈线性（P = 0.001）和二次（P = 0.006）下降。在底物中添加BTS和OBC对原虫和黄色瘤胃球菌的数量没有影响,但是BTS有降低产琥珀酸丝状杆菌的趋势（P = 0.054）。试验2添加0,1.9,3.8和7.6 mg/200 mg底物的PTS,同样6 mg/200 mg底物的CTS作为正对照,同样体外培养24小时后,取样测定甲烷产量、瘤胃发酵指标和微生物数量。结果表明:在底物中添加CTS对产气没有影响,但是随着PTS添加量的增加,产气量呈线性（P = 0.005）和二次（P = 0.014）下降。CTS和PTS对瘤胃pH和乙酸比例没有影响,但甲烷、氨氮含量和乙丙比却显著下降（P < 0.05）且随PTS添加量增加呈线性和二次下降（P < 0.05）。丙酸比例随着CTS和PTS的添加增加而增加（P < 0.05）。添加PTS有增加总挥发性脂肪酸浓度的趋势（P = 0.081）,但是随着CTS和PTS的增加丁酸的比例却降低（P < 0.05）。在底物中添加CTS和PTS可以降低（P < 0.05）原虫和产琥珀酸丝状杆菌的数量,且PTS随添加量的增加呈线性和二次下降,但是甲烷菌和真菌的数量没有影响。CTS对黄色瘤胃球菌的数量没有变化,但是PTS却显著降低了（P < 0.05）黄色瘤胃球菌的数量,且随PTS添加量的增加呈线性（P = 0.008）和二次（P = 0.017）降低。由此可见,在粗茶皂素中对甲烷产量和瘤胃发酵以及瘤胃微生物起作用的是其中的皂甙组分,而非皂甙活性物质有能增加甲烷产量作用。试验三研究了纯品茶皂素对小鼠的急性毒性实验,试验设8个处理,分别灌注0,2.64,3.1,3.65,4.3,5.06,5.95,7.0 g/kg小鼠体重的茶皂甙。由试验结果可得,茶皂甙对ICR小鼠的半数致死量(LD50)为3.24 g/kg,且此半数致死量的可信限为2.86-3.54 g/kg。LD5和LD95分别为1.87 g/kg和5.60 g/kg小鼠死亡率和剂量对数的回归方程为Y（Probit）=1.48+6.9002Log（D）。茶皂甙对小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、大脑、心脏和肠管均有毒性,而脾脏无明显病理变化。