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研究目的:比较不同结核杆菌抗原在诱导活动性骨关节结核患者细胞免疫应答中的作用,选出优势诱导Th1型细胞免疫的抗原,并进一步观察iNKT细胞激活剂α半乳糖神经酰胺(α-GalCer)刺激优势抗原诱导Th1型细胞免疫反应应答。研究方法:1.采集活动性骨关节结核患者,潜伏性结核感染者及健康对照者外周血,应用酶联免疫吸附法检测各组血清中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10浓度,应用流式细胞术对外周血单个核细胞(PBMC)中的CD4+IFN-γ+细胞进行检测。2.分别将抗原Ag85B、ESAT-6、CFP-10及PPD加入活动性骨关节结核患者PBMC中刺激培养,检测各组IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10水平和CD4+IFN-γ+细胞比例,定量PCR及免疫印迹检测转录因子T-bet、GATA-3的表达。3.将Ag85B抗原和α-GalCer加入活动性骨关节结核患者外周血单个核淋巴细胞共同培养,检测各组IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10的浓度以及CD4+IFN-γ+细胞比例,并采用Real time-PCR及Western blot对JAK/STAT通路各蛋白表达水平进行检测。研究结果:1.与潜伏性结核感染组和健康对照组相比,活动性骨关节结核组血清IFN-γ、IL-2水平和CD4+IFN-γ+细胞比例显著降低(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平却显著升高(P<0.01)。2.Ag85B抗原组和ESAT-6抗原组IFN-γ浓度明显高于PPD组(P<0.01),而CFP-10抗原组IFN-γ浓度与PPD刺激组没有显著差异(P>0.05);IL-2水平方面,Ag85B组浓度高于PPD组(P<0.01),而ESAT-6组和CFP-10组与PPD组相比无统计学差异(P>0.05);三种实验抗原(Ag85B、ESAT-6及CFP-10)与PPD组相比IL-4、IL-10水平差异不具有统计学意义(P>0.05);Ag85B组CD4+IFN-γ+细胞比例和T-bet水平较其他组高(P<0.05),而GATA-3水平差别无统计学意义(P>0.05)。3.α-GalCer/Ag85B刺激组Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)分泌明显升高(P<0.05),而Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)降低(P<0.05);α-GalCer/Ag85B刺激组分泌IL-12增多(P<0.05);α-GalCer/Ag85B刺激组可以明显上调PBMC细胞内Jak2、Tyk2、STAT1和STAT4的表达水平,对Jak1、Jak3和STAT6的表达没有统计学意义。研究结论:活动性骨关节结核患者Th1型细胞因子分泌受到抑制;结核抗原Ag85B可以通过上调转录因子T-bet诱导优势Th1型免疫反应;α-GalCer与Ag85B抗原可能增强经IFN-γ诱导的IL-12的产生激活JAK/STAT信号路径而增加Th1极化优势诱导Th1型免疫反应。