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根据GenBank中已发表的Marc-145细胞中波形蛋白的全基因序列使用DNA-Star软件设计一对特异性引物V1: 5’-CAGCCATGACCACCAGG-3’,V2: 5’-AAGGTCAAGACGTGCCAG-3’送交引物合成公司合成,利用常规提取RNA方法从Marc-145细胞中提取细胞总RNA然后通过RT-PCR方法扩增出长度为1401bp的波形蛋白全基因片段;经过质粒PCR和质粒双酶切鉴定将阳性菌送交测序公司测序,经过比对证明扩出的序列为波形蛋白全基因序列;合成带有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,通过质粒PCR获得PCR产物胶回收PCR产物,双酶切胶回收产物和载体pET28a后用T4连接酶连接,经过鉴定成功构建出原核表达载体pET28a-Vimentin;将其转化到表达细胞BL21(DE3)诱导表达,获得分子质量为57Kd的重组表达蛋白,经过Western-blot进一步验证重组波形蛋白成功表达。周恩民教授通过免疫网络学说,制备出抗PRRSV GP5蛋白的抗独特性抗体5G2,5G2是GP5蛋白的镜影像,能够模拟GP5蛋白的功能,通过IP实验成功得到了一个新型受体蛋白命名为5号受体,通过重复IP实验得到新型受体蛋白,经电洗脱得到纯化的新型受体蛋白。I-ELISA方法证明表达的重组波形蛋白与PRRSV的核衣壳蛋白N蛋白结合而不与囊膜蛋白GP5蛋白结合,同时I-ELISA方法也证明重组表达的波形蛋白与提纯的新型受体蛋白结合。以纯化的重组波形蛋白做免疫原免疫BALB/c小鼠,制备出抗重组波形蛋白的阳性血清,用I-ELISA方法检测阳性血清抗体效价,显示阳性血清稀释到1:10万时A450的值大于未免疫小鼠血清的A450的值即P/N>2.1说明免疫小鼠产生了抗重组波形蛋白的抗体即得到了抗波形蛋白的高免血清,IFA试验证明此阳性血清能够与PRRSV易感的Marc-145细胞结合;通过病毒阻断试验证明抗重组波形蛋白的鼠阳性血清在稀释度为1:10和1:20,PRRSV的加入量为每孔100TCID50能有效阻断PRRSV感染Marc-145细胞。实验结论:波形蛋白得到成功表达,重组波形蛋白能够与PRRSV的N蛋白结合,而不与GP5蛋白结合,进一步说明重组波形蛋白是PRRSV的受体之一;通过I-ELISA方法证明重组波形蛋白与提纯出的新型受体蛋白结合。对PRRSV受体的研究有助于揭示PRRSV与宿主细胞之间的相互关系,有助于阐明PRRSV的融合和进入易感细胞的过程,更有助于揭示PRRSV的致病机制,从而对于PRRSV的预防及控制提供了新的研究思路。