银屑病是一种环境与遗传等多种因素共同作用导致的一种多基因遗传性炎症性皮肤病。它是皮肤科最常见的影响患者身心健康,并且给患者家庭和社会造成沉重经济负担的慢性疾病之一。银屑病在临床上常分为以下四型:寻常型银屑病,脓疱型银屑病,关节病型银屑病和红皮病型银屑病。银屑病的发病病因和发病机制尚未研究的十分清楚。目前认为银屑病是由T细胞介导的以人表皮角质形成细胞为靶点的免疫介导的一种疾病。Th22是目前关于银屑病方面研究最前沿的T细胞亚群。IL-22是IL-10家族的成员之一,Th1细胞、Th17细胞和Th22细胞均可分泌细胞因子IL-22。国内外均有研究表明IL-22在银屑病患者外周血中和皮损处表达量明显高于正常人水平,同时研究还表明IL-22的表达水平与银屑病患者病情的严重程度呈正相关;银屑病患者治疗后,其外周血和皮损处的IL-22的表达均较治疗前降低。这表明IL-22在银屑病的发病机制中起着重要作用。CCL28又被称为黏膜相关上皮趋化因子(mucosae-associated epithelial chemokine,MEC)。它是Pan等在2000年首次报道的一种CC类家族的一种趋化因子。CCL28的基因是位于人类的5号染色体的长臂上,它主要表达于黏膜组织的上皮细胞中,例如:唾液腺、乳腺、呼吸道和生殖道等。国外研究表明,在银屑病患者的血清和皮损中CCL28的表达量明显高于正常人。CCL28的受体有两种,分别为CCR3和CCR10。CCR3的配体有许多,常见的是趋化因子5、趋化因子8、趋化因子7等。但是CCR10的受体只有两种,分别是CCL27和CCL28。CCL27和CCL28有高度的同源性,我们前期的研究表明IL-22可以促进CCL27的表达,从而影响角质形成细胞的增殖和分化,且IL-22可能是通过MAPK-ERK1/2通路进行调节从而发挥其生物学效应。由此我们推测,IL-22在银屑病患者的体内可能通过MAPK-ERK1/2通路影响人表皮角质形成细胞中CCL28的表达,从而影响人角质形成细胞的增殖和分化。但是目前关于IL-22与CCL28相关性的研究尚未见报道。因此在本课题中我们通过采用IL-22及MAPKERK1/2通路阻断剂处理HaCaT细胞,检测IL-22对HaCaT细胞中CCL28表达的影响;另一方面,我们通过给5%咪喹莫特诱导产生银屑病样皮损的小鼠模型皮下注射IL-22,并检测其皮损组织中CCL28的表达。目的:本研究通过免疫组化的方法检测CCL28在银屑病患者和健康人皮肤组织中的表达的差异性;再分别通过细胞实验及动物实验探究IL-22对HaCaT细胞和银屑病样小鼠模型皮肤组织中CCL28表达量的影响,从而探究IL-22/CCL28轴在银屑病的发病机制中的作用。方法:1、取12例银屑病患者皮肤组织标本和12例健康人皮肤组织标本。银屑病患者的标本来源于天津医科大学总医院皮肤科病理室,这些患者已经临床结合病理确诊为银屑病;健康人皮肤组织标本来源于天津医科大学总医院(空港医院)整形美容科经手术切下来的正常皮肤组织。用免疫组化的方法分别检测正常人和银屑病患者皮肤组织中CCL28的表达。2、将培养的HaCaT细胞分为6组,分别给予以下干预处理:PBS对照组,12.5ug/L IL-22组,25ug/L IL-22组,50ug/L IL-22组,100ug/L IL-22组和阻断剂组(50ug/L IL-22+PD98059)。阻断剂组给予处理方式为:先将2ul MAPK-ERK1/2阻断剂PD98059加入到培养孔中使得该孔的终溶度为50umol/L,然后将其放入到37℃的细胞培养箱进行培养;2小时后,再向该孔中加入IL-22使得IL-22的终浓度达到50ug/L,然后放入37℃的细胞培养箱进行培养。24小时后,用CCK8法来检测HaCaT细胞增殖情况;提取干预后的HaCaT细胞总mRNA和总蛋白,采用RT-PCR、Western Blot及ELISA检测各组HaCaT细胞中CCL28的表达;用免疫荧光检测CCL28在HaCaT细胞中表达位置。采用SPSS21.0软件进行单因素方差分析和Dunnett-t检验,P<0.05认为有统计学意义。3、将雌性BALB/c小鼠随机分为四组,其中两组实验组的小鼠背部皮肤给予涂咪喹莫特乳膏处理,另外两组对照组的小鼠背部皮肤给予涂抹凡士林处理。按照同样的方法将雄性小鼠给予分组和处理。实验组的小鼠在5天后造模成功,形成了银屑病样皮损。在造模成功后,从实验组和对照组各随机选取一组,将鼠源性的IL-22注射到选取组的小鼠背部皮肤组织。48小时后,用断头法处理小鼠,将其背部皮肤组织取下,使用免疫组化的方法来检测各组小鼠皮肤组织中CCL28的表达量。结果:1、免疫组化检测表明,CCL28蛋白主要表达于人表皮细胞的细胞质中。正常人的皮肤组织中CCL28主要表达在基底层,其余各层均有少量表达,但表达较弱;而在银屑病患者的表皮组织中CCL28广泛表达,并且表达强度明显高于正常皮肤组织。2、IL-22可促进HaCaT细胞的增殖,而且还能促进HaCaT细胞中CCL28的表达,且这种促进作用呈现出浓度依赖性,即随着IL-22浓度的增加,HaCaT细胞增殖速度会加快,CCL28的表达量也会增加。另一方面,在加入MAPKERK1/2通路阻断剂PD98059后,不仅HaCaT细胞的增殖速度而且HaCaT细胞中CCL28的表达均较50ug/L IL-22组降低。3、采用5%的咪喹莫特可以成功诱导出小鼠的银屑病样皮损模型;通过在小鼠背部皮下注射IL-22可以使正常小鼠的皮肤组织和银屑病样皮损的小鼠的皮损组织中CCL28的表达量增加。结论:1、银屑病患者的表皮组织中CCL28的表达量明显高于正常人的皮肤组织中的表达。2、IL-22能浓度依赖性地促进HaCaT细胞的增殖和HaCaT细胞中CCL28的表达,且MAPK-ERK1/2通路阻断剂能阻断这种促进作用。3、IL-22可以使正常小鼠的皮肤组织和银屑病样皮损的小鼠的皮肤组织中CCL28的表达量增加。综上所述,IL-22/CCL28轴可能作为银屑病的治疗的靶点,为银屑病患者的治疗提供新的方向。