低氧刺激下Egr-1对细胞微管骨架稳定作用的研究

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早期生长反应基因Egr-1属即刻早期基因家族,其编码的蛋白产物是一种含锌指结构的转录因子、能在多种刺激因子的诱导下快速短暂表达、与多种下游基因的启动子区域相结合,上调或下调相关基因的转录,产生各种生物学功能。Egr-1不仅与细胞生长有关,而且参与多种细胞的正常分化、凋亡。Egr-1在多种恶性肿瘤中表达消失,因此,它可作为某些恶性肿瘤的生物学标记,对肿瘤的诊断及疗效评估有重要意义。Egr-1作为一种早期生长反应因子,在低氧诱导下有表达升高的现象,同时与短期低氧诱导的代谢性应激和细胞骨架重塑有关。本文研究旨在低氧作用下Egr-1对细胞微管骨架的保护调控。主要结果如下: 1.在有丝分裂间期A549细胞内的Egr-1主要分布在细胞质中,可以明显观察到有类似于微管骨架的丝状分布。在低氧刺激下Egr-1不入核,并伴有快速、短暂的表达上升。 2.细胞经过低温刺激或Nocodazole处理一段时间后,细胞微管骨架解聚。低氧处理能保护细胞微管骨架,延缓低温刺激或Nocodazole对细胞微管结构的破坏。用RNA干扰的方法下调细胞内源Egr-1的表达后,细胞骨架结构变得异常,微管收缩弯折严重,无法舒展。同时,MTT实验检测细胞活力显示,Egr-1内源表达下调后的细胞活力明显降低60%,推测主要是由于细胞凋亡引起的。 3.有丝分裂周期中,Egr-1在A549细胞中与微管骨架存在共分布现象。在前期,Egr-1能够沿着微管形成类似丝状的结构,中期形成纺锤体样,并且在中心体处产生明显的聚集,但不分布于星体微管。进入后期和末期,从中心体到细胞缢裂的中间体均有Egr-1分布,并在中间体处有很强的聚集。其中Egr-1驻留在纺锤体处及在中心体处强烈的分布提示Egr-1可能与细胞有丝分裂相关。另外,下调Egr-1的内源表达,细胞有丝分裂相明显减少,这也说明Egr-1与细胞的有丝分裂进程有关。
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