【摘 要】
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本研究以长喙田菁SrPCS基因的全长cDNA和质粒载体pBA002为基础,构建植物表达载体,对超声波处理花粉介导的长喙田菁遗传转化体系进行优化,并尝试通过超声波处理花粉介导的遗传转
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本研究以长喙田菁SrPCS基因的全长cDNA和质粒载体pBA002为基础,构建植物表达载体,对超声波处理花粉介导的长喙田菁遗传转化体系进行优化,并尝试通过超声波处理花粉介导的遗传转化方法将SrPCS基因转化长喙田菁。
主要研究结果如下:
1.根据pBYY(pBYY01,pBYY02,pBYY03)质粒上的序列设计特异引物,扩增出目的基因,并用SpeⅠ和XhoⅠ酶切目的基因和pBA002质粒载体,酶切后通过T4DNA连接酶连接,连接产物转化大肠杆菌,由阳性克隆菌提取的质粒经PCR检测、酶切检测和测序检测均表示SrPCS基因的全长cDNA已经整合到质粒pBA002中,植物表达载体构建成功,命名为pBASrPCS(pBASrPCS1,pBASrPCS2),为遗传转化长喙田菁和其他植物提供条件。
2.对超声波处理花粉介导的长喙田菁遗传转化体系进行优化。包括对影响花粉保存活力因素、超声波处理缓冲液成份、超声波处理参数等的优化,结果显示适宜花粉保存的温度为-20℃或者-70℃,超声波处理缓冲液中以蔗糖浓度10%,硼酸浓度为100mg/L时效果最佳;超声波处理参数以处理功率1002w、处理时间6s、处理次数4次为最适宜长喙田菁遗传转化的超声波处理条件。
3.选用Basta作为抗性选择剂对长喙田菁种子萌发进行预试验,确定筛选浓度为4mg/L。
4.利用超声波处理花粉介导的长喙田菁遗传转化方法将构建的植物表达载体pBASrPCS1导入长喙田菁,收获长喙田菁种子经萌发筛选后获得抗性植株,但PCR尚未能检测出目的条带。
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