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目的:通过体外对默克尔细胞(MCs)、雪旺氏细胞(SCs)、人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)诱导后的雪旺氏细胞样细胞(SCLCs)的分离、培养及鉴定,观察MCs与SCLCs联合移植在足底皮肤创面触觉恢复的作用。方法:1.无菌操作获取新生3天SD大鼠幼崽足底和须垫皮肤,采用中性蛋白酶和胰蛋白酶级联消化法分离提取MCs,培养6天后,细胞免疫荧光鉴定MCs,及Western Blot检测CK20和Piezo2蛋白的表达,ELISA测定不同时间CGRP分泌量。2.无菌操作获取新生3天SD大鼠幼崽坐骨神经,采用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶消化分离提取SCs。细胞免疫荧光鉴定P3代SCs。3.采集足月剖宫产羊膜,采取胰蛋白酶和胶原酶级联消化法分离提取hAMSCs。细胞免疫荧光鉴别P3代hAMSCs。4.取P3代hAMSCs,在加入适当诱导因子,将hAMSCs诱导为SCLCs。分别取SCs和SCLCs做细胞免疫荧光检测 S-100、P75、GFAP表达,以及Western Blot检测S-100、P75、GFAP蛋白的表达。5.建立SD大鼠足底全层皮肤缺损模型,分为四组:假手术组(原皮肤切开)、模型组(生理盐水)、对照组(SCs联合MCs移植组)、实验组(SCLCs联合MCs移植组),每组10只;观察创面愈合情况;第0、7、10、14天行Von fren纤维测定缩足反射阈值;第0、7、14天行棉拭子缩足检测;提取愈合创面皮肤组织做Western Blot检测Piezo2、MBP的蛋白表达。结果:1.采用酶消化法可以得到原代MCs,培养至第6天,行细胞免疫染色鉴定,CK20和Piezo2高显色;Western Blot和qPCR的检测结果表明实验组比对照组表达水平明显升高(p<0.05);CGRP分泌量随时间增长而增加(p<0.05)。2.采用酶消化法可以得到原代SCs,培养至P3代后行细胞免疫荧光鉴定,S-100、P75、GFAP均高显色。3.采用酶消化法可以得到原代hAMSCs,培养至P3代后行细胞免疫荧光鉴别,结果hAMSCs组细胞vimentin高表达,CK19不表达。4.诱导后的SCLCs行细胞免疫荧光鉴定,SCLCs组的S-100、P75、GFAP均高显色,而hAMSCs组不显色;WB检测S-100、P75、GFAP蛋白相对表达量,结果示SCLCs组比hAMSCs组表达水平明显高(p<0.05)。5.四组创面愈合速度为假手术组<对照组≈实验组<模型组;在第0、7、14天做棉拭子缩足反应检测以及在第0、7、10、14天Vonfren纤维测定缩足反射阈值,所得结果为假手术组>对照组>实验组>模型组(p<0.05),具有统计学差异;Western Blot检测愈合创面皮肤组织的Piezo2、MBP的蛋白表达,发现模型组的这两种蛋白表达显著低于实验组和对照组,灰度定量后得(p<0.05),统计学差异明显。结论:SCLCs联合MCs能够促进皮肤创面触觉恢复。