脱氧胸苷酸和脱氧胸苷三磷酸在医药、食品以及科研方面具有非常广泛的用途。在本课题中，利用渗透化的共表达胸苷激酶和乙酸激酶全细胞为催化剂，由脱氧胸苷合成脱氧胸苷酸;利用渗透化的共表达胸苷酸激酶和乙酸激酶为催化剂，由脱氧胸苷酸一步合成脱氧胸苷三磷酸。　　将来自大肠杆菌的胸苷激酶(TKase)、乙酸激酶(ACKase)和胸苷酸激酶(TMKase)基因重新克隆到大肠杆菌中，构建三种单基因重组菌。利用同尾酶的方法将单基因tk和ack，以及tmk和ack分别插入到同一表达载体pET-28a中，构建可同时表达TKase和ACKase的重组菌p28AT和p28TA，以及同时表达TMKase和ACKase的重组菌pAT和pTA。在此基础上，进一步将ack mk k基因以不同顺序克隆到同一质粒，获得可同时表达三种酶的重组菌。所获得的重组菌均可高效的表达出所需蛋白。　　为增加细胞的渗透性对重组菌进行渗透化处理。EDTA处理后的重组菌细胞相对较为稳定，酶活损失较少。利用渗透化的共表达全细胞p28AT催化dTR生成dTMP，反应8小时后dTMP的转化率为89％;使用渗透化的全细胞pAT将dTMP直接磷酸化为dTTP，反应4小时后dTTP的转化率达94％。两种途径均以ATP为反应的能量供体，利用ACKase催化ATP能量再生系统，由乙酰磷酸再生反应所需的ATP，在反应体系中加入微量的ATP即可提供反应所需的全部能量。