ERRγ在肾透明细胞癌中的表达及其功能学研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qjesen
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目的:大量相关文献研究证实细胞核受体家族在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,同时其表达水平的变化与肿瘤预后存在密切相关。根据前期芯片结果提示,ERRy在不同分期的肾透明细胞癌中存在明显的差异化表达,而这一现象在肾透明细胞癌中的可能的作用还未见相关文献报道。本实验旨在研究核受体家族中ERRy受体在肾透明细胞癌肿瘤组织和瘤旁组织中的mRNA水平和蛋白水平表达情况及其在肾透透明细胞中的增殖侵袭相关的生物学作用。方法:选取56对肾透明细胞癌手术冰冻标本和相应癌旁正常肾实质组织,采用免疫组化、Western blot法和实时定量PCR检测ERRy在肾透明细胞癌细胞株和离体组织标本中蛋白和mRNA水平的表达情况,同时在体外培养的肾小管上皮HKC细胞系、肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P中检测相应表达。设计慢病毒过表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-ESRRG和空载体对照组,构建肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P稳定高表达ERRy的细胞株,通过MTS法、流式细胞仪和划痕试验分别检测细胞增值率、细胞周期和细胞横向迁移的变化。结果:免疫组化和western blot的检测结果表明与癌旁正常肾实质组织相比,ERRy蛋白的表达水平在肾透明细胞癌组织中明显降低,和肾小管上皮HKC细胞系相比,ERRy的表达水平在肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P中均降低(p值均<0.05);同时在临床病理中ERRy的mRNA水平与肾透明细胞癌病理的Fuhrman核分级呈显著负相关(p<0.05),而且女性肾癌患者组织中的ERRymRNA表达要显著高于男性患者(p<0.05)。在786-O和769-P细胞系的功能实验中,稳定高表达ERRy的细胞株与空载体转染组的细胞株相对照比较,MTS法显示前者的增值率明显降低,流式细胞仪检测显示高表达ERRy的细胞株S期细胞比例明显降低并有G0/G1细胞比例明显增加,划痕试验显示高表达ERRy后的细胞系其横向迁移生长速率明显减慢。结论:ERRy在肾透明细胞癌中的表达显著降低,其表达水平与病理Fuhrman核分级之间存在显著相关性,且明显受患者性别影响。肾透明细胞癌的肿瘤发生发展中ERRy可能发挥了抑制肿瘤生长的作用。
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