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目的:本项研究通过X射线反复照射胃癌BGC823细胞,筛选出在高能X线电离辐射过程中产生放疗抵抗和放疗耐受的细胞株BGC823/IR,再利用细胞克隆实验和Western blot技术探究胃癌BGC823细胞与BGC823/IR细胞对X射线敏感度,即探究胃癌的放疗敏感性。方法:(1)常规培养胃癌BGC823细胞株,待细胞状态良好并且可以稳定传代后,镜下观察胃癌BGC823细胞,待细胞增殖速度最快时,即进入对数期培养液初变黄的时候,将细胞拿到VARIAN直线加速器下行6MV X射线照射,剂量率200cGy/min,源皮距100 cm,照射野10cm×10 cm,在培养瓶下放置1 cm厚度凡士林填充块模拟人体皮肤;将已经接受2Gy剂量照射后的胃癌BGC823细胞置入恒温细胞培养箱中培养至细胞状态良好、稳定传代,再取对数期细胞重复上述步骤再接受2Gy X射线辐射剂量;以此类推至胃癌细胞累积剂量分别达到2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy……30Gy;将每组不同累计剂量的胃癌BGC823细胞冻存留标本。(2)利用平板细胞克隆实验检测未经X射线诱导的BGC823细胞株(对照组)与X射线诱导的BGC823细胞株(实验组)的存活率并制作存活曲线。(3)Western blot方法检测胃癌BGC823细胞和胃癌BGC823/IR细胞中P-XRCC1和γ-H2AX蛋白的表达量;检测胃癌BGC823细胞在不同剂量不同时间段的Cleaved-caspase-3、PARP-1、γH2AX表达量。结果:(1)细胞平板克隆实验中,0Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy对应剂量下:胃癌BGC823细胞集落形成率(PE,plate efficiency)分别是56.7%、44.2%、17.7%、4.0%、0.21%、0;胃癌BGC823/IR细胞细胞集落形成率分别是53.6%、52.6%、26.0%、6.25%、1.53%、0.16%。(2)Western blot方法检测到在4 Gy 6 MV X射线照射后0h、3 h、6 h、9 h时间段胃癌BGC823细胞中P-XRCC1蛋白表达量分别是0.398、0.312、0.217、0.184,胃癌BGC823/IR细胞中P-XRCC1蛋白表达量分别是0.402、0.620、0.997、1.174。胃癌BGC823细胞中P-XRCC1表达随着时间延长逐渐降低,胃癌BGC823/IR细胞中P-XRCC1表达随着时间延长逐渐增高,且胃癌BGC823细胞与胃癌BGC823/IR细胞的表达量之间有统计学意义(P<0.05)。胃癌BGC823细胞中γ-H2AX表达量分别是0.245、0.748、1.254、1.468,胃癌BGC823/IR细胞γ-H2AX表达量分别是0.262、0.268、0.711、1.183。胃癌BGC823细胞中γ-H2AX表达随着时间延长逐渐增高,胃癌BGC823/IR细胞中γ-H2AX表达也随着时间延长逐渐增高,但是胃癌BGC823细胞中的γ-H2AX表达量大于对应时间段的胃癌BGC823/IR细胞γ-H2AX表达量,且胃癌BGC823细胞与胃癌BGC823/IR细胞的表达量之间有统计学意义(P<0.05)。检测胃癌BGC823细胞Cleaved-caspase-3、γH2AX的表达量随着剂量增加而升高,PARP-1表达量随着剂量增高呈现降低趋势;在24小时时间段Cleaved-caspase-3、γH2AX、PARP-1表达量趋势走向和12小时表达量一致,但表达量绝对值明显低于12小时的表达量。结论:(1)细胞平板克隆实验提示放疗抗性胃癌BGC823/IR细胞株在接受6 MV X射线照射后的细胞存活率高于胃癌BGC823细胞株,提示胃癌BGC823/IR细胞株X射线照射过程中产生放射抵抗,可能和细胞修复机制有关。Western blot方法中胃癌BGC823/IR细胞株在放疗过程中产生P-XRCC1的表达量呈现递增趋势,而胃癌BGC823细胞株P-XRCC1的表达量呈现递减趋势,提示胃癌BGC823/IR细胞株产生的修复作用大于胃癌BGC823细胞株产生的,且修复作用随着时间推移越来越强;胃癌BGC823/IR细胞株在放疗过程中产生γ-H2AX的表达量呈现递增趋势且趋势小于胃癌BGC823细胞株,提示在X射线诱导下胃癌BGC823/IR细胞株产生的损伤作用小于胃癌BGC823细胞株产生的。胃癌BGC823细胞Cleaved-caspase-3、γH2AX的表达量随着剂量增加而升高,PARP-1表达量随着剂量增高呈现降低趋势,提示胃癌放射抗拒性可能和细胞凋亡率有关系。(2)胃癌放射抗性细胞株BGC823/IR的产生可能和细胞修复机制有关。