人VEGF165对肝硬化大鼠半肝切除术后余肝再生能力的影响

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目的:观察外源性人血管内皮生长因子165(hVEGF165)对肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝再生及肝功能恢复的影响。方法:采用基因重组技术构建hVEGF165慢病毒表达载体,通过Real time PCR法测定病毒滴度;携带hVEGF165基因的慢病毒载体体外转染BLR3A大鼠肝细胞72h后,利用RT-PCR与Western blot法检测细胞中hVEGF165mRNA及蛋白的表达;传统CCl4诱导法构建大鼠肝硬化模型,肝穿刺病理学检查法鉴定模型;126只肝硬化大鼠行50%肝切除术后随机分为3组,A组(VEGF165组):门静脉注射hVEGF165慢病表达毒载体;B组(空病毒组):门静脉注射空慢病毒载体;C组(对照组):门静脉注射PBS缓冲液。分别于术前、术后12h、24h、72h、7d、14d及28d检测各组大鼠余肝组织hVEGF165mRNA与蛋白的表达、肝再生率、PCNA阳性表达率及门静脉血液中ALT与AST含量。结果:成功构建了表达hVEGF165的慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO-hVEGF165,测得病毒滴度为:1.18×107v.p./mL。重组慢病毒表达载体转染BLR3A大鼠肝细胞72h后,荧光蛋白表达率超过80%,RT-PCR与Western blot法测得转染组hVEGF165mRNA及VEGF165蛋白表达阳性,而阴性对照组及空白对照组表达阴性;肝硬化大鼠模型制模成型率为96.18%;VEGF165组术后72h至术后28d肝再生率分别为34.98±6.22%、62.19±1.81%、83.54±4.50%、92.23±4.41%,术后24h至术后28d PCNA阳性表达率分别为18.05±0.92%、42.89±5.52%、35.56±3.86%、26.37±1.35%、19.48±2.70%均显著高于对照组(P<0.01);术后72h至术后28d血清ALT含量分别为258.14±12.94U/L、215.67±22.12U/L、175.92±8.78U/L、133.26±13.92U/L,血清AST含量分别为553.34±14.10U/L、481.37±14.74U/L、425.95±5.04U/L、388.29±15.99U/L均较对照组明显下降(P<0.01)。结论:外源性hVEGF165可促进肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝的再生及肝功能的恢复。
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