福建柑桔种质的RAPD分析及龙眼LEAFY基因克隆和表达的研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:ynkm8899
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本论文中“福建柑桔种质的RAPD分析”部分,对柑桔基因组DNA的提取方法作出探索。在参考有关RAPD分析的反应体系和程序的基础上,对影响PCR扩增的重要参数进行优化,经过反复试验,确立了适合柑桔大量样品PCR反应的优化体系和反应程序。筛选出扩增多态性较高的引物21条,对从福建各地所采集的54份柑桔材料(包括杂柑种质)进行RAPD鉴定分析,并探讨了它们之间的差异和亲缘关系;此外,对聚类结果中几个品种间的差异和亲缘关系进行了再次聚类分析,以验证第一次的聚类结果。结果表明,在遗传距离D值=0.45水平上,54份柑桔材料基本上可以聚为三大类,与常规的柑桔属分类相同,即金柑属、枳属、柑桔属,表现出较远的亲缘关系:在遗传距离D值=0.39水平上,柑桔属种质又可分成三类。这充分表明了福建柑桔种质的遗传背景复杂,种质资源遗传差异大;同时也说明了使用RAPD技术对柑桔种质资源遗传多样性及其之间的亲缘关系鉴定的可行性和可靠性。 本论文中“龙眼LEAFY基因克隆和表达的研究”部分,对龙眼总RNA和基因组DNA的提取方法进行了优化;根据柑桔、葡萄、梨、苹果和芒果等果树上已克隆得到的LFY同源基因的保守区序列,设计合成兼并引物,在龙眼果树上克隆得到了长度分别为425bp和1816 bp龙眼中的LFY cDNA和DNA片段,且都已经在GenBank中登录,其登记号分别是DQ247694和DQ307391;利用定量RT—PCR方法,将兼并引物重新合成特异引物,对此基因在龙眼不同器官组织中的表达情况进行了研究分析,实验得知LFY基因在龙眼花序芽、冲梢芽、花芽、叶芽中都有表达,在茎段和叶片中没有表达,从扩增的DNA条带的亮度可以看出,龙眼LFY基因在花序芽中的表达量最大,其次是花芽和冲梢芽(冲梢芽中的表达稍弱于花芽),叶芽中的表达量较小:最后,利用RACE方法,根据本实验所得LFY cDNA序列,设计3′—端特异引物,克隆得到了此基因的3′—端的序列。
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